研究概要 |
褐色細胞腫細胞PC12を神経成長因子(NGF)によって交感神経細胞様細胞へと分化誘導を行なうとテトラヒドロビオプテリン(BPH4)含量が一過的に上昇する。このNGFの作用の機構について、PCl2のサブクロ-ンの1つであるPCl2h細胞を用いて検討し、以下のような結果を得た。 1)BPH4生合成系において調節酵素であると考えられている酵素、GTP cyclohydrolase(GTPCH)の活性に対するNGFの交化について検討し、GTPCH活性がNGFで一過的に上昇することを見い出した。NGFの効果のタイムコ-ス実験やNGF濃度依存性の実験結果は、NGFのBPH4の一過的上昇作用は、GTPCH活性の一過的上昇によって起きるものであることを示している。 2)GTPCH活性上昇の機構について明かにするため、RNA合成阻害剤(actinomycin D,AD)およびタンパク質合成阻害剤(cycloheximide,CH)の影響について検討した。AD、CHともにNGFによるGTPCH活性上昇を抑制したが、対象の細胞のGTPCH活性にはほとんど影響を与えなかった。この結果はNGFの作用がGTPCHの活性化によるというよりも、GTPCH酵素タンパク質の生合成を増加させることによって起きるものであることを強く示唆している。 3)プロテインキナ-ゼ(PK)阻害剤、H-8は高濃度(100μM)ではNGFによるGTPCH活性上昇をある程度阻害したが、各種PKに対するK_i値付近の濃度(1-22μM)では影響を与えなかった。NGFのGTPCHに対する作用はPK-A、PK-G、PK-Cなどを介していないと考えられる。
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