| 研究概要 |
1.マウスPGK2遺伝子のクローン化.
cDNA, ゲノムDNAともクローン化には至っていない. 昨年9月に同遺伝子のクローン化とその構造解析が他のグループにより報告された. その報告によるとゲノムDNAはイントロンを含まないとのことである. そこで今後はゲノムDNAのみのクローン化を続けることにした. 現在ミニライブラリーを製作しクローン化を進めている.
2.オリゴヌクレオチドプローブによるPGK1, PGK2に遺伝子発現の解析 報告された塩基配列に従ってPGK1, PGK2それぞれに特異的な配列を有する50塩基のオリゴヌクレオチドを合成した. RNAブロット解析においてPGK1プローブはマウス肝臓より得たRNAにのみ, またPGK2プローブはマウス精巣より得たRNAにのみ, 約1.6K6のmRNAを検出した. 従ってこれらプローブを用いてPGK1, PGK2のmRNAをそれぞれ特異的に検出できることがわかった. 現在各種マウス培養細胞について分化誘導, 内在がん遺伝子発現の変動等の変化を与えたときにPGK遺伝子の発現がどのように変化するかを解析中である.
3.マウス細胞由来の無細胞転写系の作製.
PGK遺伝子のプロモーター解析を行うための無細胞転写系をマウス腹水癌(EAT)細胞を用いて作製した. EAT細胞核抽出液中でマデノウイルスの後期遺伝子, E1A遺伝子がともに忠実に転写された. よってこの抽出液を用いてPGK遺伝子の転写解析が可能であることがわかった.
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