| 研究概要 |
1.組織形成と細胞膜糖蛋白質糖鎖構造-ラット能肺肝腎脾筋肉の各組織のアスパラギン(Asn)結合糖鎖は、基本的に高マンノース型や複合型2本鎖を主体とし、各臓器により複合型3本鎖、4本鎖やシアル酸フコース、α-ガラクトース、hisecting N-アセチルグルコサミン、N-アセチルラクトサミン含量に差がみられいた。この臓器間の糖鎖構造の差は、臓器特異性を示すと共に、臓器を構成する細胞群の多様性に由来する可能性もある。一方細胞間接着の認められる島形成型腹水肝癌AH7974細胞は、複合型3本鎖、4本鎖の高分岐化高分子量化した糖鎖を主体とし、これは癌性変化によるものと考えられた。これに対し、細胞間接着の消失したAH414細胞は、AH7974細胞同様の癌性変化による高分岐化、高分子量化糖鎖の増大が認められたが、これ以外にフコシル化混成型糖鎖の出現が認められた。混成型糖鎖は高マンノース型から生じ、α-mannosidaseIIの作用を経て複合型へ移行するので、AH414細胞ではα-mannosidaseIIの作用しない糖鎖生合成経路が活性化されていると考えられる。2.細胞膜のムチン型糖蛋白質の解析-シアル酸残基を標識した糖蛋白質の低密度WGAカラムへの結合量は、AH414細胞でその35%とAH7974細胞正常肝の2倍、5倍と多角、アルカリ処理で糖鎖を遊離し、プロナーゲ消化でも高分子ペプチドとして存在する事から、ムチン型糖鎖が高密度に存在する糖蛋白質であくと推定された。遊離したムチン型糖鎖の60%はシアル酸を含む酸性糖鎖で、GalNAC,Galβ1→GalNAC、Galβ1→(GlcNACβ1→)GalNACの基本構造から成っていた。3.糖転移酵素活性-正常肝、両腹水肝癌細胞のミクロソーム画分を用いて、Asn-結糖鎖ムチン型糖鎖合成に関与するガラクトース転移酵素を測定すると両腹水肝癌で活性は上昇し、特にAH414細胞でムチン型酵素活性は正常肝、AH7974細胞の2-3倍増大していた。今後この様な混成型糖鎖ムチン型糖鎖を発現する細胞膜の糖蛋白質の同定が、その機能と関連して重要と思われる。
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