1989 年度実績報告書

哺乳動物細胞における遺伝子の再編機構に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号	63440086
研究機関	東京大学
研究代表者	池田日出男東京大学, 医科学研究所, 教授 (10012775)
研究分担者	増田明子東京大学, 医科学研究所, 教務職員 (90134626) 本田正明東京大学, 医科学研究所, 助手 (20012742)
キーワード	遺伝的組換え / 相同的組換え / 非相同的組換え / DNAジャイレ-ス / DNAトポイソナラ-ゼ / recA蛋白質 / ヒストンH1 / トランスポゾン
研究概要	動物細胞の遺伝的組換えの機構を理解することは、遺伝子疾患や癌化の原因となる遺伝子の再編機構を明らかにする上で重要であり、また動物細胞レベルでの遺伝子としての遺伝子のタ-ゲッティングのための基礎的資料を得るうえでも重要である。まず第一に、動物細胞での研究の基礎資料を得る目的で、大腸菌における組換えの研究を行なった。昨年度から行なっている大腸菌のDNAジャイレ-スに依存する欠失の形成機構の研究は更に進展し、欠失の起こりやすい箇所にDNAジャイレ-スのDNA切断のコンセンサス配列に類似した配列があることがわかった。また、バクテリオファ-ジT4のDNAトポイソメラ-ゼが大腸菌内で非相同的組換えを行なうことを明らかにし、ファ-ジのトポイソメラ-ゼの三つの遺伝子(39、52、60)がすべて組換えに関与していることを示した。次に、動物細胞の組換えでは、相同的組換えに関与する蛋白質を解析する目的で、DNA鎖転移反応をアッセイ法として用いて仔牛胸腺粗抽出液中に大腸菌recA蛋白質様活性を検出し、単一の蛋白にまで精製した。さらに物理化学的性質、電気泳動上の挙動、およびウエスタンブロットによる解析から、この蛋白質はヒストンH1のサブタイプのひとつに一致することが明らかになった。詳しい解析の結果、ヒストンH1は、相補的な一本鎖DNA間のアニ-リング反応を行なうことやすべてのサブタイプがこの活性を持っていることがわかった。ヒストンH1が実際にin vivoにおいて組換えに関与しているかどうか今後の検討課題である。更に、昨年度報告したサル細胞のαーサテライト配列の転移の研究が更に進展し、転移したDNAの構造がトランスポゾン様DNAの性質を持っていることを明らかにした。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Tomono,M.,Shiozaki,M.,and H.Ikeda: "Formation of trunsdusing phage In Vitro:Involvement of DNA gyrase" J.Biochem. 105. 423-428 (1989)
[文献書誌] Kawasaki,I.,Sugano,S.and H.Ikeda.: "Calf thymus histone H1 is a recombinase that catalyzes ATPindependent DNA strand transfer." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 86. 5281-5285 (1989)
[文献書誌] Chiba,M.,Shimizu,H.,Fujimoto,A.,Nashimoto,.H.and H Ikeda: "Common sites for recombination and cleavagemediated by bacteriophage T4 DNA topoisomerase In Vitro." J.Biol.Chem.264. 12785-12790 (1989)
[文献書誌] Kawakami,K.,Naito,S.,Inoue,N.,Nakamura,Y.,Ikeda,H.and H.Uchida: "Isolation and characterization of herC,a mutation of Escherichia coli affecting maintainance of col E1." Mol.Gen.Genet.219. 333-340 (1989)
[文献書誌] Miura Masuda,A.,and H.Ikeda: "The gyrse of Escherichia coli participates in the formation of a spontaneous celetion by recA-independent recombination in vitro." Mol.Gen.Genet.
[文献書誌] Ikeda,H.: "DNA topoisomerase-mediated recombination." “DNA topoisomerases"(Eds.N.Cozzarelli and J.Wang)Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.
[文献書誌] 池田日出男: "シリ-ズ分子生物学の進歩,「DNAの構造と動態」第8章動く遺伝子系と組換え" 丸善, 33 (1989)

1989 年度 実績報告書

哺乳動物細胞における遺伝子の再編機構に関する研究

研究代表者

池田 日出男 東京大学, 医科学研究所, 教授 (10012775)

研究成果

[文献書誌] Tomono,M.,Shiozaki,M.,and H.Ikeda: "Formation of trunsdusing phage In Vitro:Involvement of DNA gyrase" J.Biochem. 105. 423-428 (1989)

[文献書誌] Kawasaki,I.,Sugano,S.and H.Ikeda.: "Calf thymus histone H1 is a recombinase that catalyzes ATPindependent DNA strand transfer." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 86. 5281-5285 (1989)

[文献書誌] Chiba,M.,Shimizu,H.,Fujimoto,A.,Nashimoto,.H.and H Ikeda: "Common sites for recombination and cleavagemediated by bacteriophage T4 DNA topoisomerase In Vitro." J.Biol.Chem.264. 12785-12790 (1989)

[文献書誌] Kawakami,K.,Naito,S.,Inoue,N.,Nakamura,Y.,Ikeda,H.and H.Uchida: "Isolation and characterization of herC,a mutation of Escherichia coli affecting maintainance of col E1." Mol.Gen.Genet.219. 333-340 (1989)

[文献書誌] Miura Masuda,A.,and H.Ikeda: "The gyrse of Escherichia coli participates in the formation of a spontaneous celetion by recA-independent recombination in vitro." Mol.Gen.Genet.

[文献書誌] Ikeda,H.: "DNA topoisomerase-mediated recombination." “DNA topoisomerases"(Eds.N.Cozzarelli and J.Wang)Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.

[文献書誌] 池田日出男: "シリ-ズ分子生物学の進歩,「DNAの構造と動態」第8章 動く遺伝子系と組換え" 丸善, 33 (1989)

1989 年度実績報告書

池田日出男東京大学, 医科学研究所, 教授 (10012775)

[文献書誌] 池田日出男: "シリ-ズ分子生物学の進歩,「DNAの構造と動態」第8章動く遺伝子系と組換え" 丸善, 33 (1989)