| 研究課題/領域番号 |
63470135
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
物質生物化学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
井上 康男 東京大学, 理学部, 助教授 (30004336)
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| 研究分担者 |
北島 健 東京大学, 理学部, 助手 (80192558)
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| 研究期間 (年度) |
1988 – 1990
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| キーワード | プロテア-ゼ / ニジマス卵プロテア-ゼ / ポリシアロ糖タンパク質(PSGP) / ポリシアロ糖タンパク質分解酵素 / 能卵の受精と卵活性化 / 魚卵表層胞在プロテア-ゼ / PSGPase / PSGPaseの基質特異性 |
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| 研究概要 |
ニジマス未受精卵表層胞に局在するポリシアロ糖タンパク質(PSGP)を受精直後に特異的に切断するプロテア-ゼ(PSGPase)は受精という重要な生物現象に関わる極めてユニ-クなタンパク質分解酵素である。本研究ではPSGPase浩性の新しい測定法(塩化セチルピリジニウムと反応物・生成物とのコンプレックスの溶解度の差を理用するアッセイ法)を開発し、それを利用してニジマス未受精卵からPSGPaseを単離・精製する方法を確立した。まず、PSGPaseは低塩濃度条件下においてのみ活性発現がみられること、更に低塩濃度処理によって高分子型(160K)からより活性の高い低分子量型(17K)へと変換することをHPLC法を用いて明らかにした。その結果、酵素比活性をcontex画分からの粗抽出液の約1万倍にまで高めることができた。この精製酵素標品を用いてPSGPaseの酵素化学的諸性質を調べた。殊に、基質特異性に関して種々のサケ科魚未受精卵から精製したPSGPを天然基質および種々の合成ペプチドを合成基質として使用することにより、ニジマスPSGPaseの基質特異性はAsp残基のNー端側を切断し、しの際切断部位から3残基Nー端側のPro残基の存在が重要であることを明確にした。
ニジマス未受精卵PSGpaseは基質であるPSGP分子と表層胞中に共存していることが決定された。受精あるいは人為的卵活性に伴う表層胞のexocytosisによって両著とも囲卵腔中に放出・局在変化され、酵素反応の場となることが明らかにされた。
以上要約した本研究の成果は、従来報告のないユニ-クなタイプのプロテア-ゼPSGPaseの同定と酵素化学的諸性質を明確にしたばかりではなく、そのユニ-クな基質特異性から今後のタンパク質化学分野での有用性を保証するものである。
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