| 研究課題/領域番号 |
63480089
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
高橋 迪雄 東京大学, 農学部, 教授 (30011943)
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| 研究分担者 |
小西 秀彦 東京大学, 農学部, 助手 (50153581)
塩田 邦郎 東京大学, 農学部, 助教授 (80196352)
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| キーワード | 20d-hydroxysteroid dehydrogenase(20d-HSD) / progesterone / 20d-dihydroprogesterone(20d-OHP) / 偽妊娠 / 黄体相 |
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| 研究概要 |
20d-HSDを300匹の成熟雌ラット卵巣サイトゾル画分より、DEAE-TOYO-PEARL(DEAE)、Matrex GreenA、AF-Red TOYOPEARLカラムクロマトグラフィーで高度に精製し、2種類の精製標品得た(HSD1とHSD2)。これらは、SDS-PAGE上で分子量約33Kに単一バンドを示し、単量体でありながら、異なった基質協同性・等電点を持っていた。
次に、精製標品を用いて本酵素に対する特異抗体を作成した。この抗体を用いて20d-HSDエンザイムイムノアッセイ系を確立し、分子量約48Kの20d-HSD前駆体を発見した。
黄体相初・中期および末期卵巣中でのHSD1とHSD2の各活性を調べたところ、黄体相を通じてHSD1活性はほぼ一定量存在するのに対し、HSD2活性は黄体相の時期の推移に伴い減少することが判明した。また、黄体相初・中期の卵巣サイトゾルをDEAEで前処理することにより、その活性が上昇した。このことは、この時期の20d-OHP分泌量低下は、酵素量の低下によるものではなく、活性抑制物質の存在によっている可能性を示唆している。このように、20d-HSDの活性調節には、HSD1・HSD2の生合成調節機構に加えて、活性抑制物質による調節機構の存在する事が明らかとなった。
以上、63年度に予定していた研究計画の大部分と64年度に計画したものの内、卵巣中での酵素活性と酵素量の調節機構に関する研究、および卵巣組織内20d-HSDの免疫組織学的研究に関しては、当初の予定をはるかに越える研究業績を得た。一方、本年度の予定に含まれているラジオイムノアッセイ系の確立はその途上にあるので、本年度確立した研究基盤をもとに、来年度の予定である遺伝子レベルの研究と平行しておこなっていきたい。なお、最近我々は20d-HSD活性抑制物質の分離に成功したので、さらにこの精製を進めたい。
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