腸管感染原因菌の産生する細胞破壊毒の病原性の分子生物学的解析

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 63480154
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 三輪谷 俊夫 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (60029759)
• 研究分担者: 余 明順 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (70093482) ; 有田 美知子 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (10127178) ; 山本 耕一郎 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (30158274) ; 本田 武司 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (60029808)
• キーワード: 溶血 / 腸炎ビブリオ / 病原性 / クロ-ン化 / 変異 / タンパク構造 / DNA配列

研究概要

1.V.mimicusのなかでNAG-rTDHと異なる溶血毒を産生する菌株からNAG-rTDH以外の溶血毒を分離精製した。その結果この毒素がエルト-ル溶血毒と免疫学的、生物学的にエルト-ル溶血毒と類似する毒素であることを見い出した。
2.神奈川現象陽性腸炎ビブリオから耐熱性溶血素遺伝子(tdhS)をクロ-ン化した。この菌株はtdh類似の遺伝子を2コピ-有していたのでtdhSを、プロ-ブとしてさらにもう一つの遺伝子tdhAをクロ-ン化し、両者の全塩基配列を決定した。その結果tdhAがTDHの構造遺伝子であることが明かとなった。現在tdhAを用いて変異株を分離し変異部位を解析中である。
3.V.metchenikoviiから大腸菌で溶血性を示す遺伝子をクロ-ン化した。しかしこの遺伝子が産生する溶血毒は既存の溶血毒抗体では中和することが出来なかった。このことは本菌がV.metsch-CTL以外に複数の溶血毒遺伝子を有していることを示唆している。

研究成果

• [文献書誌] Honda,T.,Ni,Y.,and Miwatani,T.: "Purification of a TDH-related hemolysin produced by a Kanagawa phenomenon-negative clinical isolate of Vibrio parahaemolyticus 06:K46." FEMS Microbiol.Lett.57. 241-246 (1989)
• [文献書誌] Miyake,M.,Honda,T.,and Miwatani,T.: "Effects of divalent cations and saccharides on Vibrio metschnikovii cytolysin-induced hemolysis of rabbit erythrocytes." Infect.Immun.57. 158-163 (1989)
• [文献書誌] Honda,T.,Cakir,N.,Arita,M.,and Miwatani,T.: "Purification and characterization of the CS2 pili of colonization factor antigen II produced by human enterotoxigenic Escherichia coli." Microbiol.Immunol.33. 265-275 (1989)
• [文献書誌] Sato,M.,Arita,M.,Honda,T.,and Miwatani,T.: "Characterization of a pilus produced by Aeromonas hydrophila." FEMS Microbiol.Lett.59. 325-330 (1989)
• [文献書誌] Tsuji,T.,Fukuyama,K.,Matsubara,H.,Honda,T.,and Miwatani,T.: "Crystallization and preliminary X-ray diffraction study of the heat-labile enterotoxin B subunit produced by enterotoxigenic Escherichia coli." J.Mol.Biol.208. 207-208 (1989)
• [文献書誌] Honda,T.,Ni,Y.,Yoh,M.,and Miwatani,T.: "Production of monoclonal antibodies against thermostable direct hemolysin of Vibrio parahaemolyticus and application of the antibodies for enzyme-linked immunosorbent assay." Med.Microbiol.Immunol.178. 245-253 (1989)
• [文献書誌] Iida,T.,Tsuji,T.,Honda,T.,Miwatani,T.,Wakabayashi,S.,Wada,K.,and Matsubara,H.: "A single amino acid substitution on B subunit of Escherichia coli enterotoxin affects its oligomer formation." J.Biol.Chem.264. 14065-14070 (1989)
• [文献書誌] Tsuji,T.,Yao,S.,Joya,J.E.,Honda,T.,and Miwatani,T.: "Charge heterogeneity of heat-labile enterotoxins from human enterotoxigenic Escherichia coli." FEMS Microbiol.Lett.61. 1-6 (1989)
• [文献書誌] Honda,T.,Ni,H.,Hori,S.,Takakura,H.Tsunasawa,S.,Sakiyama,F.,and Miwatani,T.: "A mutant hemolysin with lower biological activity produced by a mutant Vibrio parahaemolyticus." FEMS Microbiol.Lett.61. 95-100 (1989)
• [文献書誌] Yoh,M.,Honda,T.,and Miwatani,T.: "Homogeneity of a hemolysin(Vh-rTDH)produced by clinical and envitronmental isolates of Vibrio hollisae." FEMS Microbiol.Lett.61. 171-176 (1989)
• [文献書誌] Honda,T.,Wetprasit,Arita,M.,and Miwatani,T.: "Pilus colonization factors of enterotoxigenic Escherichia coli isolated from infantile diarrheal patients in Papua New Guinea." Amer.J.Trop.Med.Hyg.41. 220-223 (1989)
• [文献書誌] Honda,T.,Ni,Y.,Yoh,M.,and Miwatani,T.: "Evidence of immunologic cross-reactivity between hemolysins of Vibrio hollisae and Vibrio parahaemolyticus demonstrated by monoclonal antibodies." J.Infectious Diseases. 160. 1089-1090 (1989)