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1.抗サイトケラチンモノクロ-ナル抗体の作製
ヒト肺癌由来株化培養細胞から抽出した細胞骨格蛋白を、Balb/cマウスに免疫後脾細胞を取出し、マウスミエロ-マ細胞と細胞融合を行なった。組織切片上での酵素抗体法にて抗体産制細胞をスクリ-ニングし、5株の抗体産制クロ-ンを得た。それらの内、25G抗体は組織切片上での染色性が最もよく、かつ原発巣や組織型の異なる種々の癌組織に幅広く反応した。この25G抗体(subclassはIgG1)をマウス腹腔内に注射し濃縮抗体を得た。次いでプロテインAカラムを通してIgGを精製した。
2.ELISA法への応用と患者髄液中での定量
精製IgGをマイクロタイタ-プレ-トに吸着させ、抗原、抗ケラチンポリクロ-ナル抗体、ビオチン化抗ウサギγグロブリン、ストレプトアビジンアルカリフオスファタ-ゼの順に反応させ、基質液で発色後405nmで吸光度を測定した。当初、ポリクロ-ナル抗体の代わりにビオチン化モノクロ-ナル抗体(25G)を用いる方法を試みたが、測定感度が悪く使用を断念した。表皮ケラチン蛋白を標準抗原として上記ELISA法を施行し、50ng/mlまで測定可能な標準曲線を得た。この系にて、転移性脳腫瘍17例、原発脳腫瘍20例(神経膠腫10例、悪性リンパ腫5例、髄芽腫2例、髄膜腫2例、神経鞘腫1例)、健常者9例の髄液中ケラチン蛋白の定量を行い、転移性脳腫瘍患者5例(29%)に陽性例を認めた。一方、原発脳腫瘍20例、健常者9例では全例検出感度以下であった。
以上の結果より、ケラチン蛋白が転移性脳腫瘍患者の髄液中マ-カ-として有用である事が示唆された。
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