| 研究課題/領域番号 |
63480491
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
川口 昭彦 東京大学, 教養学部, 助教授 (80013332)
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| 研究分担者 |
小関 良宏 東京大学, 教養学部, 助手 (50185592)
山田 晃弘 東京大学, 教養学部, 教授 (50012266)
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| キーワード | 脂肪酸合成酵素 / アシルキャリアタンパク / ユーグレナ |
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| 研究概要 |
Englena gracilisを光照射下独立栄養的に生育すると、クロロプラストが発達してII型脂肪酸合成酵素の活性が上昇することを確認した。また、暗条件下で従属栄養的に生育すると、II型脂肪酸合成酵素の活性は残っているが、I型合成酵素の活性が高くなることが確認できた。このI型脂肪酸合成酵素の抗体を得る目的で、Englena gracilisのクロロプラストが欠けた変異株を入手し、これからI型合成酵素を精製することを試みた。細胞の粗抽出液の段階では非常に酵素活性が低かったが、一段階精製操作を行うことによって大きく比活性が上昇した。この標品を用いて実験を行った結果、次のような事実が明らかになった。
1)脂肪酸合成活性の発現には還元力としてNADPHとNADHの両方が必要である。
2)活性発現には、アシルキャリアタンパク(ACP)は必要ない。
3)この脂肪酸合成酵素の分子量は、500,000ダルトン以上である。
以上の事実より、この酵素は可溶性画分に存在するI型酵素であると結論した。これを精製する予備的実験を行い、粗抽出液を硫安分画、ゲルロカ、DEAE-セルロースクロマトグラフィー、超遠心法により精製できる目途が立った。
上記のI型酵素の精製と平行して、II型合成酵素系の細胞内分布あるいは、活性発現を調べるために、ACPの抗体を調整することを試みた。ACPはホウレンソウの葉から精製した。この精製ACPを用いて抗体を作成した。この抗体を用いて、光照射によって誘導されるACP合成を機構および、ACPの細胞内分布を調べる予定である。
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