遺伝子組換えにより合成されたエリスロポエチンの糖鎖構造と生理活性との相関

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 63480504
• 研究機関: 名古屋市立大学看護短期大学部
• 研究代表者: 高橋 のり子 名古屋市立大学看護短期大学部, 看護学科, 教授 (90079989)
• 研究分担者: 石原 英子 名古屋市立大学, 薬学部, 助教授 (90080192)
• キーワード: エリス ポエチン / 遺伝子組換え糖蛋白質 / BHK細胞 / アスパラギン結合オリゴ糖 / シアル酸

研究概要

天然エリスロポエチン(患者尿より精製)および遺伝子工学的にBHK細胞およびψ2細胞に合成されたエリスロポエチンを雪印乳業生物科学研究所から入手する。
エリスロポエチン糖タンパク質のすべての糖鎖の完全構造決定を行なうために、前年度はまず非還元末端に多数結合しているシアル酸を前以て除去した後、申請者の開発した中性糖鎖のための二次元糖鎖マップ法により構造を推定した。
その研究途中に、エリスロポエチンのシアル酸が生理活性に大きな影響をもつことが明らかになってきた。しかしシアル酸をもつ糖鎖の構造決定にはまだ確立した分析システムが無いため、申請者はまず分析システムを確立してからエリスロポエチンのシアル酸を含む全糖鎖構造を解明する計画をたてた。
まずシアル酸の微量組成分析法を確立した。これはシアリダ-ゼでシアル酸を遊離させ、DIONEX社のBioーLC糖鎖分析システムの陰イオン交換カラムで分析する方法であるが、多量のタンパク質が共存すると定量が妨害される。結局小さな陽イオン交換カラムをプレカラムとして用いることにより微量定量が可能になった。しかしシアロオリゴ糖の分析までには至らなかった。

研究成果

• [文献書誌] Jainxin Gu: "Chemical deglycosylation of hen ovomucoid:Protective effect of carbohydrate moiety on tryptic hydrolysis and heat denaturation." J.Biochem.106. 66-70 (1989)
• [文献書誌] Kensuke Yamazumi: "A γ methionineー310 to threonine substitution and consequent Nーglycosylation at γ asparagineー308 identified in a congenital dysfibrinogenemia associated with posttraumatic bleeding,Fibrinogen Asahi." J.Clin.Invest.83. 1590-1597 (1989)
• [文献書誌] Noriko Takahashi: "Structural study of asparagineーlinked oligosaccharide moiety of testーmoddifying protein,Miraculin." J.Biol.Chem.(1990)
• [文献書誌] Makoto Hayashi: "Structure and biosynthesis of the xyloseーcontaining carbohydrate moiety of rice αーamylase" Eur.J.Biochem.
• [文献書誌] Yuan C.Lee: "Parameterization of contribution of sugar units to elution volumes in reverse phaseーHPLC of 2ーpyridylaminated oligosaccharides." Anal.Biochem.
• [文献書誌] Royston Jefferis: "Comparative structral study of the Nーlinked oligosaccharides of human IgG subclass proteins." Biochem.J.
• [文献書誌] 高橋のり子 編著: "生物化学実験:糖蛋白質糖鎖の構造研究法" 学会出版センタ-(東京), 204 (1989)