精製したTn3とランスポゼ-ヌによるin vitro DNA再編成反応系

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 63480512
• 研究機関: 関西医科大学
• 研究代表者: 杉野 義信 関西医科大学, 医学部, 教授 (00028177)
• 研究分担者: 森田 正之 関西医科大学, 医学部, 講師 (20148555)
• キーワード: トランスポゾン / Tn3 / トランスポゼ-ス / DNA欠失 / IHF / モノクロ-ナル抗体

研究概要

1.精製したトランスポゼ-スによるDNA欠失形成のin vitro系がすでに確立していたが、これはTn3とランスポゼ-スの他、IHF蛋白を含む反応系である(Proc.Japan Acad.,65SerB,1ー4,1989),但し、in vivo反応にみられる欠失末端の塩基配列についての特異性がみられなかった。反応産物の塩基配列決定を多数の分子について行った結果、欠失の大部分は短い相同的配列間で生じていることが判明した(関医大教養部紀要,13巻,印刷中)。
2.地方、in vivoにおいてHUとIHF蛋白の関与の有無を、突然変異体を用いて検索した。その結果意外にも、HU,IHFのどちらも、in vivoで不要と判明した(Gene,76,359ー362,1989;J.Kansai Med.Univ.,41,79ー86)。
3.トランスポゼ-スがス-パ-ヘリカルDNAに優先的に結合すること(関医大教養部紀要,13巻、印刷中)並びにトランスポゼ-スとDNAの特異的結合と非特異的結合が異なるモノクロ-ナル抗体で阻害されること(投稿準備中)を見いだした。
4.Tn3トランスポゼ-スの関与するらしい反応で今までに知られていない新しいタイプの興味あるDNA再編成即ち"staggerd headーtoーhead dimer"の形成が起こることが判明した(投稿準備中)。
5.Tn3トランスポゼ-ス遺伝子中にIS4の挿入されたミュ-タントを発見、その挿入部位の塩基配列を決定し、その特異性について新しい知見を得た(Gene,96,129ー132)。
6.方法面での貢献として、ポリエチレングリコ-ルによる形質転換法の改良(Nucleic Acids Res.,18,6169 1990)、ヘキスト33342の蛍光による高感度DNA定量法(Hitachi Scientific Instrument News,34(1),印刷中)などを発表した。

研究成果

• [文献書誌] Nishimura,A.,Morita,M.,Nishimura,Y.& Sugino,Y.: "A rapid and highly efficient method for preparation of competent Escherichia coli cells." Nucleic Acids Res.18. 6169 (1990)
• [文献書誌] Morita,M.& Sugino,Y.: "Insertion of IS4 into the tnpA gene of Tn3:sequencing of the insertion site." Gene. 96. 129-132 (1990)
• [文献書誌] 杉野 義信: "日立F3000型蛍光分光光度計を用いたDNAの高感度定量法" Hitachi Scientific Instrument News. 34. (1991)
• [文献書誌] Morita,M.& Sugino,Y.: "Preferential binding of Tn3 transposase to superherical DNA." 関西医科大学教養部紀要. 13. (1991)
• [文献書誌] Morita,M.& Sugino,Y.: "Sequence analysis of the DNA deletions produced by incubation with the Tn3 transposase and the integration host factor in vitro:comparison with in vivo products." 関西医科大学教養部紀要. 13. (1991)
• [文献書誌] Morita,M.& Sugino,Y.: "Construction of an in vitro system involving the Tn3 transposase that catalyzes the formation of DNA deletions."
• [文献書誌] Sugino,Y.& Morita,M.: "Existence in Escherichia coli of a mechanism that generates "staggered"headーtoーhead dimers of plasmid DNA;Possible involvement of the Tn3 transposase."
• [文献書誌] Sugino,Y.& Takeda,T.: "Monoclonal antibodies distinguish between specific and nonーspecific DNA binding of Tn3 transposase"