1989 年度実績報告書

サルモネラべん毛レギュロンにおける転写制御機構の研究

研究課題

研究課題/領域番号	63540500
研究機関	東京大学
研究代表者	沓掛和弘東京大学, 理学部, 助手 (90143362)
キーワード	べん毛レギュロン / 遺伝子発現 / 転写調節 / 調節タンパク質 / 試験管内転写系
研究概要	サルモネラべん毛髪レギュロンの正の転写調節遺伝子fliAをクロ-ン化し塩基配列を決定した。塩基配列から推定されるFliAタンパク質の一次構造は既知の多くのRNAポリメラ-ゼのシグマ因子と相同性が高いことが判明し、FliAタンパク質はべん毛オペロンの転写に特異的なシグマ因子である可能性が示唆された。組換えDNA実験技術を用いてFliAタンパク質の過剰生産菌を作成し、そこからFliAタンパク質を単離・精製した。RNAポリメラ-ゼのコア酵素を含むin vitro転写系に精製したFliAタンパク質を添加すると、べん毛遺伝子の転写が特異的に検出されるようになることが確認され、上記の仮説が証明された。さらに、昨年度の研究で精製されたべん毛レギュロンの負の転写調節タンパク質RflBをこの系に添加すると、べん毛遺伝子の転写が特異的に阻害されることが示された。これによって、in vivoでの知見がin vitroで完全に証明されたことになる。一方、多数分離したfliA突然変異体の中には、負の制御因子であるRflBタンパク質が存在した方が高いシグマ因子活性を示すものがあることがわかった。また、RflBタンパク質に非感受性の発現をするようになったべん毛オペロンのプロモ-タ-突然変異体は、すべて同時にFliAタンパク質に非依存性の転写を起こすことが示された。以上の結果は、RflBタンパク質による負の転写制御がFliAタンパク質との相互作用を介して行われている可能性を示唆するものである。実際、精製されたFliA、RflB両タンパク質はin vitroで複合体を形成し、この複合体形成がFliAタンパク質とRNAポリメラ-ゼのコア酵素との相互作用を阻害することを示す結果が得られた。そこで、RflBタンパク質をアンチ・シグマ因子と命名した。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Wada,M.,Kutsukake,K.,Komano,T.,Imanoto,T.,Kano,Y.: "Participation of the hup gene product in site-specific DNA inversion in Escherichia coli." Gene. 76. 345-352 (1989)
[文献書誌] Kihara,M.,Homma,M.,Kutsukake,K.,Macnab,R.M.: "Flagellar switch of Salmonella typhimurium:Gene sequences and deduced protein sequences." Journal of Bacteriology. 171. 3247-3257 (1989)
[文献書誌] Inoue,Y.H.,Kutsukake,K.,Iino,T.,Ymaguchi,S.: "Sequence analysis of operator mutants of the phase-1 flagellinencoding gene,fliC,IN Salmonella typhimurium." Gene. 85. 223-228 (1989)
[文献書誌] Homma,M.,Kutsukake,K.,Hasebe,M.,Iino,T.,Macnab,R.M.: "FlgB,FlgC,FlgF,FlgG:A family of structurally related proteins in the flagellar basal body of Salmonella typhimurium." Journal of Molecular Biology. 211. (1990)
[文献書誌] Kutsukake,K.,Ohya,Y.,Iino,T.: "Transcriptional analysis of flagellar regulon of Salmonella typhimurium." Journal of Bacteriology. 172. (1990)
[文献書誌] Ohnishi,K.,Kutsukake,K.,Suzuki,H.,Iino,T.: "Gene fliA encodes an alternative sigma factor specific for flagellar regulon in Salmonella typhimurium." Molecular and General Genetics. (1990)
[文献書誌] 沓掛和弘: "微生物学ハンドブック" 石川辰夫、駒形和男、杉山純多、田中健治、堀寛、水島昭二、柳田友道編丸善株式会社, (1990)

1989 年度 実績報告書

サルモネラべん毛レギュロンにおける転写制御機構の研究

研究代表者

沓掛 和弘 東京大学, 理学部, 助手 (90143362)

研究成果

[文献書誌] Wada,M.,Kutsukake,K.,Komano,T.,Imanoto,T.,Kano,Y.: "Participation of the hup gene product in site-specific DNA inversion in Escherichia coli." Gene. 76. 345-352 (1989)

[文献書誌] Kihara,M.,Homma,M.,Kutsukake,K.,Macnab,R.M.: "Flagellar switch of Salmonella typhimurium:Gene sequences and deduced protein sequences." Journal of Bacteriology. 171. 3247-3257 (1989)

[文献書誌] Inoue,Y.H.,Kutsukake,K.,Iino,T.,Ymaguchi,S.: "Sequence analysis of operator mutants of the phase-1 flagellinencoding gene,fliC,IN Salmonella typhimurium." Gene. 85. 223-228 (1989)

[文献書誌] Homma,M.,Kutsukake,K.,Hasebe,M.,Iino,T.,Macnab,R.M.: "FlgB,FlgC,FlgF,FlgG:A family of structurally related proteins in the flagellar basal body of Salmonella typhimurium." Journal of Molecular Biology. 211. (1990)

[文献書誌] Kutsukake,K.,Ohya,Y.,Iino,T.: "Transcriptional analysis of flagellar regulon of Salmonella typhimurium." Journal of Bacteriology. 172. (1990)

[文献書誌] Ohnishi,K.,Kutsukake,K.,Suzuki,H.,Iino,T.: "Gene fliA encodes an alternative sigma factor specific for flagellar regulon in Salmonella typhimurium." Molecular and General Genetics. (1990)

[文献書誌] 沓掛和弘: "微生物学ハンドブック" 石川辰夫、駒形和男、杉山純多、田中健治、堀寛、水島昭二、柳田友道 編 丸善株式会社, (1990)

1989 年度実績報告書

沓掛和弘東京大学, 理学部, 助手 (90143362)

[文献書誌] 沓掛和弘: "微生物学ハンドブック" 石川辰夫、駒形和男、杉山純多、田中健治、堀寛、水島昭二、柳田友道編丸善株式会社, (1990)