ヒト血小板のアラキドン酸酸素添加酵素の動態に関する研究

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 63570115
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 吉本 谷博 徳島大学, 医学部, 助教授 (60127876)
• キーワード: シクロオキシゲナ-ゼ / 12-リポキシゲナ-ゼ / アラキドン酸 / 血小板 / 酵素免疫測定法 / モノクロ-ン抗体

研究概要

ヒト血小板の脂肪酸シクロオキシゲナ-ゼおよび12-リポキシゲナ-ゼに対するモノクロ-ン抗体を調製し、これを用いて各々の酵素の酵素免疫測定法を開発した。このサンドイッチ法による酵素免疫測定法は、これまでの^<14>C標識アラキドン酸を用いて酵素活性を測定する方法に比べて10倍以上も感度が高く、血小板における酵素の動態を追究できる。
これまで臨床的に血小板のシクロオキシゲナ-ゼ欠損症と思われる症例が報告されており、この患者血小板の酵素を今回開発した免疫測定法で解析した。血小板凝集作用をもつトロンボキサン(TX)A_2の生成には、シクロオキシゲナ-ゼ(アラキドン酸→PGH_2)およびTXA合成酵素(PGH_2→TXA_2)関与している。種々の酵素学的検討を行なった結果、この患者の血小板においては、TXA合成酵素は正常であるが、シクロオキシゲナ-ゼ活性が著明に低下していることが分った。シクロオキシゲナ-ゼは血小板のミクロソ-ムに局在しており、この酵素を非イオン性界面活性剤で可溶化して酵素免疫測定法を行なった結果、この患者においては正常人とほとんど同じレベルのシクロオキシゲナ-ゼ蛋白が検出された。従って、患者血小板においては、免疫学的には正常のものと区別できないが、酵素活性の著明に低下しているシクロオキシゲナ-ゼ蛋白が存在しているものと考えられる。
アラキドン酸12-リポキシゲナ-ゼについても、同様の酵素免疫測定法を確立し、21才から54才までの健常男女22人の血小板における酵素含量を測定した。血小板の12-リポキシゲナ-ゼ含量には年令差はほとんど認められなかった。また、男性よりも女性の方が酵素含量が多い傾向があったが、統計学的な有意差は認められなかった。
本研究で開発した酵素免疫測定法は、血小板の機能とその病態を解析してゆく過程において、今後有用な研究手段になるものと期待される。

研究成果

• [文献書誌] Sumitani,K.: "Fatty acid cyclooxygenase activity stimulated by transforming growth factor-β in mouse osteoblastic cells(MC3T3-E1)" Arch.Biochem.Biophys.270. 588-595 (1989)
• [文献書誌] Maruyama,T.: "Immunohistochemical study on arachidonate 12-lipoxygenase of porcine tissues" J.Histochem.Cytochem.37. 1125-1131 (1989)
• [文献書誌] Ueda,N.: "Localization of arachidonate 12-lipoxygenase in parenchymal cells of porcine anterior pituitary" J.Biol.Chem.(1990)
• [文献書誌] Yoshimoto,T.: "Cloning and sequence analysis of the cDNA for arachidonate 12-lipoxygenase of porcine leukocytes" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 87. (1990)
• [文献書誌] Konishi,Y.: "A peroxidase-linked immunoassay of arachidonate 12-lipoxygenase of human platelets"
• [文献書誌] Yoshimoto,T.: "Lipoxygenase in Inflammation" Academic Press, (1990)
• [文献書誌] Yoshimoto,T.: "Advances in PG,TX and LT Research" Raven Press, 82-85 (1989)