| 研究概要 |
ヒト赤血球膜より酸化型グルタチオン(GSSG)とグルタチオンS-拘合体で活性化を受ける新しいMg^<2±> ATPaseを見出し、その生化学的、酵素学的性状を検討した。(方法)新鮮ヒト静脈血より洗浄赤血球を調整し、10mMトリス塩酸緩衝液、PH7.4で洗浄して溶血させ、遠沈にて膜成分をとり出した。更に0.5%トリトンX-100で処理した膜成分を超遠沈にかけて、蛋白の可溶化を行い、次にS-ヘキシルグルタチオンを結合したセファロース4Bカラムを用いて酵素を分画し、更にセファクリルS-400カラムを用いて精製した。(結果)アフィニティーカラムからの溶出でS-ヘキシルグルタチオンに対して異なる親和性を有する2つの酵素画分が得られた。各々の画分は比活性約1000nmolpi放維/mg蛋白/分で、100ml赤血球を原料として約100mgずつ得られた。この酵素標品の分子量は15万で85,000と65,000の2ケのサブユニットを有していた(SDS-電気泳動)。アフィニティーカラムから最初に溶出されるI型アイソザイムはGSSGを基質としてKmが150μM、後から溶出されるII型アイソザイムが2mMであった。ATPに対してはI型が80μM、II型が140μMのKmを示した。これらの酵素はNa^+-K^+-ATPase活性やCa^<2±>ATPase活性を示さず、ウワバインやFGTAで抑制されなかったことから、即に知られているイオン輸送を司る膜ATPaseとは異なるものである。II型アイソザイムはP-クロロマーキュリベンゾエイトNEMで阻害され、ジチオスレイトールの添加で活性化を受けたが、一方I型はこれらチオール剤添加で活性変化を示さなかった。これら酵素はS拘合体によっても同様に活性化されたが、還元型グルタチオンでは活性化を受けなかった。即に赤血球膜にはATPを利用するグルタチオン輸送系が存在することが知られているが、その輸送系と本酵素の性状が極めて類似していることから、本酵素がGSSGなどの膜輸送に関与していることが強く示唆された。
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