Salmonella cholerasuisの感染に及ぼす毒カプラスミドの影響

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 63570205
• 研究機関: (社)北里研究所
• 研究代表者: 檀原 宏文 北里研究所, 細菌部第2室, 室長 (40114558)
• 研究分担者: 松井 英則 北里研究所、細菌部第2室, 研究員 (30219373) ; 川原 一芳 北里研究所、細菌部第2室, 室長補佐 (20195126) ; 森口 良三 北里研究所、病理部第1室, 室長 (30101299)
• キーワード: Salmonella choleraesuis / サルモネラ / 毒力プラスミド / 菌血症

研究概要

1.S.choleraesuis 50kbプラスミドpKDSC50のマウス病原性への影響の病理学的研究:pKDSC50保有株(親株、再導入株)をICRマウスに復腔接種したところ、接種後1日目から復水中の好中球やマクロファ-ジが活性化し、これが14日目まで持続した。また腸間膜、卵管間膜、膵蔵、腸間膜リンパ節、脾臓及び肝臓において14日間にわたり病変が観察された。一方pKDSC50脱落株接種マウスでは感染初期に好中球反応、腹膜表層の病変が見られたものの、病変はpKDSC50保有株に比べて軽度且つ一過性であった。以上によりpKDSC50のマウス病原性への影響はLD_<50>,血流、臓器中の菌の有無のみならず他の病理所見においても顕著に見られることが示された。2.pKDSC50のS.choleraesuis 細胞表層仏質への影響:pKDSC50保有株と脱落株について細菌細胞表層成分であるリポ多糖、外膜蛋白質、リン脂質を化学分析、電気泳動、薄層クロマト等の手法を用いて比較分析した。その結果、有意な差異は認められず、pKDSC50は主要表層成分に対して量的変化を与えないということが明らかになった。3.pKBSC50上の菌血症惹起能領域の分子遺伝学的解析:前年度のトランスポゾンによる挿入不活化実験によりpKDSC50上の6.2kbの領域が菌血症惹起能に関与する領域であることが明らかとなったので、この領域をmba領域と名づけ大腸菌にクロ-ニングした。大腸菌ミニセル法及びlacプロモ-タ-による高発現系によりmba領域にコ-ドされている蛋白質の同定したところ、29k、70k,32k,32k,の4種の蛋白質が検出された。この領域の塩基配列を決定したところ、各々の蛋白質に対応するOpen reading frameが見出された。他の研究グル-プによりS.typhimnriumのビルレンスプラスミドにも同様の蛋白質をコ-ドした遺伝子が見つかっているので、これらの蛋白質がサルモネラの病原性発現に重要な役割をはたしているものと考えられる。

研究成果

• [文献書誌] K.Kawahara,T.Hamaoka,S.Suzuki,M.Nakamura,S.Y.Murayama,T.Arai,N.Terakado,H.Danbara: "Lipolysaccharide alteration mediated by the virulence plasmid of Salmonella" Microbial Pathogenesis. 7. 195-202 (1989)
• [文献書誌] K.Kawahara,M.Tsuchimoto,K.Sudo,N,Terakado,H.Danbara: "Identification and mapping of mba regions of the Salmonella choleraesuis virulence plasmid pKDSC50 responsible for mouse bacteremia" Microbial Pathogenesis. 8. (1990)
• [文献書誌] H.Matsui,K.Kawahara,N.Terakado,H.Danbara: "Nucleotide sequence of a gene encoding a 29kDa polypeptide in cba region of the virulence plasmid,pKDSC50,of Salmonella Choleraesuis" Nucleic Acids Research. 18. (1990)
• [文献書誌] H.Matsui,K.Kawahara,N.Terakado,H.Danbara: "Nucleotide sequences of genes encoding 32kDa and 70kDa Polypeptides in mba region of the virulence plasmid,pKDSC50,of Salmonella choleraesuis" Nucleic Acids Research.
• [文献書誌] R.Moriguchi,K.Kawahara,Y.Haraguchi,Y.Nakase,H.Danbara: "Pathological study on virulence of Salmonella choleraesuis in mice associated with 50ーkilobase plasmid" British J.Experimental Pathology.
• [文献書誌] H.Danbara,K.Kawahara,M.Tsuchimoto,R.Moriguchi,N.Terakado: ""Characterization of 50ーkilobase plasmid of S.choleraesuis strain AH1ーS44"In:Cellular and Molecular Mode of Action of Selected Microbial Toxins in Foods and Feeds" Plenum Press. New York/London, (1990)