| 研究課題/領域番号 |
63570270
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
山内 春夫 新潟大学, 医学部, 教授 (30134919)
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| 研究分担者 |
内藤 笑美子 新潟大学, 医学部, 助手 (80018811)
木南 凌 新潟大学, 医学部, 教授 (40133615)
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| キーワード | DNAフィンガ-プリンティング / コ-ルド法 / エンハンスドケミルミネッセンス / 親子鑑定 / 卵性診断 |
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| 研究概要 |
本研究はDNAフィンガ-プリンティングの一般化を目指し、アイソト-プを使用しない方法(コ-ルド法)を確立するため、数種類のキットを用いてコ-ルド法を検討している。
まず、ヒト末梢血から抽出したDNAをサザントランスファ-を行ってDNA結合フィルタ-を作製した。次に、市販のキットによりプロ-ブ(おもに“myo")の標識とDNAの検出を行った。
本年度は、スルフォン化標識(宝酒造)およびビオチン標識(コスモ)プロ-ブを用いた検出法に加え、ジゴキシゲニン標識(ベ-リンガ-)プロ-ブを用いた検出法でもDNAフィガ-プリントを作成することができた。これらの方法はいずれも免疫学的手法を利用した方法であるが、最近蛍光反応を利用したECLキット(アマシャム)が発売された。この方法ではプロ-ブDNAに直接パ-オキシタ-ゼを結合し、エンハンスドケミルミネッセンスを発生させ、フィルム上にバンドを検出する。このECL法の実用性を検討したところ、他のキットに比べ価格は高いものの、(1)アイソト-プ法とほゞ同程度の感度でDNAフィンガ-プリントが得られる、(2)デ-タをフィルム上に記録できる、(3)脱プロ-ブしないでフィルタ-を再利用できる、などの利点を有しており利用価値の高いことがうかがわれた。
実際の親子鑑定や卵性診断にECL法を応用したところ、明確なバンドを示すDNAフィンガ-プリントが得られ、鑑定や診断を行うに十分な資料となり得ることがわかった。特に双生児の卵性診断においてはバンドパタ-ンが同じ場合には一卵性、異った場合では二卵性とその診断は容易であった。
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