| 研究課題/領域番号 |
63570270
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
法医学
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
山内 春夫 新潟大学, 医学部, 教授 (30134919)
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| 研究分担者 |
内藤 笑美子 新潟大学, 医学部, 助手 (80018811)
木南 凌 新潟大学, 医学部, 教授 (40133615)
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| 研究期間 (年度) |
1988 – 1990
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| キーワード | DNAフィンガ-プリント / コ-ルドプロ-ブ / エンハンスドケミルミネッセンス / 個人識別 / 親子鑑定 / 卵性診断 |
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| 研究概要 |
本研究では、アイソト-プを使用せずにDNAフィンガ-プリントを作成する方法(コ-ルド法)を確立するため、市販されている4種類のキットを用いてプロ-ブの標識とDNAの検出を行い、その実用性を検討した。
方法は、ヒト末梢血から抽出したDNAを制限酵素(HalIII)で切断し、アガロ-スゲル電気泳動を行った後、DNAをナイロンメンブランに転写した。次に各々のキットの方法でプロ-ブ(おもにmyo)を標識し、メンブラン上のDNAにハイブリさせバンドパタ-ンを検出した。
その結果、1)スルフオン化標識(宝酒造)、2)ビオチン標識(コスモ)、3)ジゴキシゲニン標識(ベ-リンガ-)、4)パ-オキシタ-セ標識(アマシャム)のいずれの標識法からもDNAフィンガ-プリントを作成することができた。1)〜3)の方法はいずれも免疫学的手法を利用し、検出の手技はやや煩雑で、デ-タ保存の爲には写真撮影が必要であった。4)の方法はエンハンスドケミルミネツセンス(ECL)を発生させるもので、他のキットに比ベ価格は高いものの、(1)アイソト-プ法とほぼ同程度の感度でDNAフィンガ-プリントが得られる。(2)デ-タをフィルム上に記録できる。(3)脱プロ-ブしないでフィルタ-を再利用できる。(4)検出操作が容易である、などの利点を有しておりDNAフィンガ-プリントの作成に利用価値の高いことが分かった。
ECLキットによるコ-ルド法を、実際の親子鑑定、双生児の卵性診断、および骨髄移植の生着確認に応用したところ、そのバンドパタ-ンはいずれも鑑定や診断を行うに十分な資料となることが分った。
DNAフィンガ-プリント法は、十分なゲノムDNAを確保できる場合、個人識別に極めて有用であり、コ-ルドプロ-ブを採用することで一般の研究室でも比較的容易に作成でき、その手技を確立しえた。
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