ヒト肺肥満細胞の増殖と分化に関する研究

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 63570341
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 丹野 恭夫 東北大学, 医学部附属病院, 助手 (20133944)
• 研究分担者: 山内 広平 東北大学, 医学部附属病院, 助手 (20200579)
• キーワード: 肥満細胞 / 好塩基球 / インタ-ロイキン / ヒスタミン / ヒスチジン脱炭酸酵素 / 腫瘍壊死因子(TNF) / 気管支肺胞洗浄 / IgE

研究概要

1.ヒト気管支肺胞洗浄液中肥満細胞培養に対するT細胞因子、インタ-ロイキン(IL)-3、IL-4、線維芽細胞ではphenotypic changeも一部の例でみられた。
2.ヒト好塩基球性白血病細胞株KU812Fよりヒスタミン合成酵素histidine decarboxylase(HDC)を精製する目的でセルマスタ-を用いて大量培養を行った。添加血清濃度を1〜2%と低量におさえ、pHを7.2〜7.4にすると、顆粒を含有する細胞が増加し、ヒスタミン含量も上昇、これらの培養より62nmol/minのHDC活性を有する961mg proteinが得られた。5段階のクロマトグラフィ-操作により350倍の精製標品を得た。PAGEでは分子量110Kdの一本のベンド,SDS-PAGEでは分子量60Kdのところに4本のバンドが得られた。この分子量は先に精製されたラットのHDCとほぼ一致する値であった。
3.KU812FからのIL-Iとtumor necrosis factor(TNF)αの産生及び遺伝子発現をみた。KU812FをPMA、Ca ionophoreA23187、LPSで30分間刺激すると上清中にIL-1α、βが検出されたが細胞障害活性は認められなかった。刺激のあるなしにかかわらずIL-1βMRNAの発現が認められたが、TNFαmRNAの発現はみられなかった。
4.先にラット好塩基性白血病細胞株RBL-2H3からIgE受容体刺激によりTNFαの産生及び遺伝子発現のあることを示した。今回はexvivoでのIgE受容体刺激による肺組織TNFαの産生と遺伝子発現を検討した。切除肺を抗DNPモノクロ-ナルIgE抗体で感作しDNP-OVAで刺激するとヒスタミンとともにTNFα活性の産生が認められ、TNFαmRNAの発現も検出された。現在、ヒト切除肺を用いて同様の検討を行っており,アレルギ-性呼吸器疾患における肥満細胞および各種サイトカインの役割を追求していく方針である。

研究成果

• [文献書誌] Y.Tanno,Y,Shindoh,T.Takishima: "Effects of inter leukin 3,interleukin 4 and fibroblasts on the culture of human lung mast cells in bronchoalveolar lavage fluids" Cell Structure and Function.
• [文献書誌] I.Ohno,Y.tanno,K.Yanauchi,S.Ida,T.Takishima: "The production of tumor necrosis factor-α by rat basophilic leukemia cells with triggering IgE,receptor" Tohoku Journal of Experimental Medicine. 156. 209-210 (1988)
• [文献書誌] R.Mamune-Sato,Y.Tanno,K.Maeyama,Y.Miura,T.Takishima,K.Kishi,T.Fukuda,T.watanabe: "Histidine decarbosylase in human basophilic leukemia(KU-812-F)cells:characlerization and induction by phorbol myristate acetate" Biochem.Pharmacol.
• [文献書誌] I.Ohno,Y.Tanno,K.Yamauchi,T.Takishima: "Production of tumour necrosis factor by masto cytoma P815 cells" Immunology. 69. (1990)
• [文献書誌] I.Ohno,Y.Tanno,K.Yamauchi,T.Takishima: "Gene expression and production of tumor necrosis factor by a rat basophilic leukemia cell line(RBL-2H3)with IgE receptor triggering" Immunology.