| 研究概要 |
1.前年度までにヒト好塩基球性白血病細胞KU812Fにヒスタミン合成酵素histidine decarboxylase(HDC)が存在し,phorbol myristate acetate(PMA)により誘導されること,大量培養により部分精製を行い,分子量約11万でラットのHDCと同様であることを示した。本年度はヒトHDCのcDNAクロ-ニングを試みた。すなわち,報告されたラットHDCのcDNAをもとにoligonucleotideを合成し,それをprobeとしてKU812FのcDNAライブラリ-をスクリ-ニングしたところpTNー1とpTNー2の2つのクロ-ンがとれ,COS誘導実験によりpTNー2の方に活性が認められた。pTNー2は2.4K base painのinsertを有し,塩基配列を沢定したところ662のアミノ酸よりなり分子量74.178であった。ラットとマウスのHDCとは85%の相同性があった。PMA刺激後のKU812FのRNAを経時的に分離し今回クロ-ニングしたcDNAをprobeとしてNorthern analyeisを行ったところ、無刺激でも2種のHDCmRNAを発現しており,経時的変化はなく,活性の誘導はtranslationのレベルでおこることが示唆された。
2.前回までにラット好塩基球性白血病細胞株RBLー2H3および切除肺を抗原刺激するとtumor necrasis factor(TNF)_<ーα>の産生と遺伝子発現のあることを示した。今回はヒト切除肺を用いて同様の検討を行なった。切除肺を細切後,ヒトモノクロ-ナルIgEで受動感作し,マウス抗ヒトIgE抗体で刺激して上清中および組織中のヒスタミンとTN下活性を測定するとともにRNAを抽出しNorthern blot analysisを行なった。ヒスタミンは刺激後1時間,TNF2時間後,TNFmRNAは1時間後から検出され4時間まで上昇した。現在,TNF産生細胞を免疫組織学的,電顕的およびin situ hybridization法により検討中である。
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