| 研究概要 |
課題の研究を進めるにあたり,アミノプロピルトランスフェラ-ゼには基質としてのポリアミン結合部位が存在すること,および活性測定で多くの情報が容易に得られることなどから,モデル蛋白質にスペルミジンおよびスペルミン合成酵素を選んだ。研究成果を箇条書きで記す。
1.スペルミジン合成酵素のプトレシン結合部位の解析:プトレシン分子の自由な動きを制限した構造を含む種々の化合物を用いて,スペルミジン合成酵素に対する阻害性および基質性を系統的に調べた。その結果,プトレシン結合部位にはプトレシンの一方のアミノ基と結合する陰電荷とその近辺に広がる比較的広い疎水空間があり,アミノプロピル化されるもう一方のアミノ基は活性部位の疎水空間に位置するとするモデルを提案した。また,本研究の過程で新しい阻害剤数種を発見した。
2.スペルミン合成酵素阻害剤の開発と活性部位構造の解析:スペルミジン合成酵素の活性部位モデルに基ずき,スペルミン合成酵素のスペルミジン結合部位構造を想定し,1で得られた阻害剤をアミノプロピル化した化合物がスペルミン合成酵素の阻害剤になると考え,実際に合成し試したところ予想通り強い阻害剤になることがわかった。また,スペルミジンのアミノプロピル基結合部位は比較的狭い空間であると思われた。
3.新しいアミノプロピル基転移反応:1で行った基質性の実験において,1級アミンと2級アミンを持つ2種類のジアミンがスペルミジン合成酵素の基質になることがわかった。その化学構造と活性部位モデルを考え合わせると,2級アミン部分がアミノプロピル化される可能性が考えられたので,実際に調べたところその通りであることが証明された。
4.ポリアミンをリガンドにもつアフィニティ吸着体:7種のポリアミンを固定化したセファロ-スを調製し,スペルミン合成酵素をモデルに2で推定した活性部位構造の妥当性,酵素の精製法について検討した。
|
