研究課題/領域番号 |
63860015
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研究機関 | 京都大学 |
研究代表者 |
木村 光 京都大学, 食糧科学研究所, 教授 (80026541)
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研究分担者 |
田口 淳一 京都府立医科大学, 薬理学, 助手 (50188132)
村田 幸作 京都大学, 食糧科学研究所, 助教授 (90142299)
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キーワード | Sーラクトイルグルタチオン / グリオキサラーゼI / 抗炎症作用 / 遺伝子工学 / 陽イオン交換体 |
研究概要 |
Sーラクトイルグルタチオンはメチルグリオキサールとグルタチオンから、酵素グリオキサラーゼIの作用により合成されるグルタチオンチオールエステルの一種である。本化合物は強い抗炎症作用を有し、その薬理効果はアミノピリンやインドメタシンに匹敵する。本化合物を大量に調製するために、本研究では(1)培養工学的手法、並びに(2)遺伝子工学的手法を用い、種々の生産条件を検討した。 1.酵母Saccharamyces cerevisiaeをグリセロールを唯一の炭素源として培養すると、グリオキサラーゼI活性はグルコース培地で生育させた場合と比べ約20倍に上昇した。そこでグリセロール培地で生育させた酵母の無細胞抽出液を用い2g/lのSーラクトイルグルタチオンを生産した。 2.細菌Pseudomonas putidaのグリオキサラーゼI遺伝子をクローニングし、大腸菌Escherichia coli C600細胞内で発現させた。その結果、グリオキサラーゼI活性は親株と比べて約120倍に増強された。そこでグリオキサラーゼI遺伝子を導入した大腸菌の無細胞抽出液を用いてSーラクトイルグルタチオンの生産を検討した結果、30g/lのSーラクトイルグルタチオンを合成することに成功した。 以上のようにして合成したSーラクトイルグルタチオンを分離精製する手段として、セレンを用いて反応液中に残存する還元型グルタチオン(GSH)を酸化型(GSSG)とし、陽イオン交換樹脂カラムに導通する方法を開発した。本法により高純度のSーラクトイルグルタチオンを効率良く分離することが可能となった。
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