1989 年度実績報告書

プロスタグランジン類の酵素兎疫測定法の開発とその自動化

研究課題

研究課題/領域番号	63870015
研究機関	徳島大学
研究代表者	山本尚三徳島大学, 医学部, 教授 (50025607)
研究分担者	林陽子徳島大学, 医学部, 助手 (60035441)
キーワード	プロスタグランジン / トロンボキサン / 生理活性物資 / 酵素免疫測定法 / モノクロ-ン抗体 / 放射免疫測定法
研究概要	生理活性物資のプロスタグランジン類を測定するための感度のよい特異性のすぐれた方法として、酵素免疫測定法を開発した。特に、プロスタグランジン類に対するモノクロ-ン抗体を調製し、親和性と特異性の一定の抗体を無限に供給できるようにと考えと、実験計画を立てた。昨年度は11-デヒドロトロンボキサン(トロンボキサンB_2よりも代謝半減期が長く、生体内トロンボキサン合成の指標となる)とロイコトリエンC_4(アナフィラキシ-ンの伝達物質)のモノクロ-ン抗体を調製できた。本年度は、特に11-デヒドロトロンボキサンB_2について、その放射免疫測定法でヒトの尿や血液中のものを定量する条件を設定した。11-デヒドロトロンボキサンB_2には、環状型(ラクトン)と開環型(ジカルボン酸)とがあるが、この抗体は開環型を認識し、したがって、試料を微アルカリで処理して開環型にした後、放射免疫測定に供した。さらに、尿や血液中の11-デヒドロトロンボキサンB_2を抽出し、精製して濃縮する方法として、抗体を使う免疫親和性をクロマトグラフィ-を試みた。抗11-デヒドロトロンボキサンB_2抗体をセファロ-スに固相化したものをカラムに詰め、尿あるいは血液(前もってODSカ-トリッジで処理した抽出物)を流すと、11-デヒドロトロンボキサンB_2は吸着され、95%メタノ-ルで抽出された。試料増量実験や標準品添加回収実験で検定すると、尿の場合は免疫親和性クロマトだけで放射免疫測定法で妥当な値が得られたが、血液の場合は前もって、ODSカ-トリッジで吸着溶出することが必要であった。こうして放射免疫測定法で得た値は、GC-MSで得た値と比較して、妥当な値であることが確認された。このように、簡便で再現性のよい免疫親和性クロマトを、他のアラキドン酸由来の生理活性物質に応用することを検討している。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Sumitani,K.: "Fatty acid cyclooxygenase activity stimulated by transforming growth factor-β in mouse osteoblastic cells(MC3T3-E1)" Arch Biochem Biophys.270. 588-595 (1989)
[文献書誌] Yamamoto,S.: "Mammalian lipoxygenases molecular and catalytic properties" Prostaglandins Leukotrienes and Essential Fatty Acids. 35. 219-229 (1989)
[文献書誌] Ban,M.: "A flavonoid inhibitor of 5-lipoxygenase inhibits leukotriene production following ischemia in gerbil brain" Stoke. 20. 248-252 (1989)
[文献書誌] Riendeau,D.: "Sensitivity of immunoaffinity-purified porcine 5-lipoxygenase to inhibitors and activating lipid peroxides" Biochem. Pharmacol.38. 2313-2321 (1989)
[文献書誌] Brash,A.R.: "Mechanistic studies of the dioxygenase and leukotriene synthase activities of the porcine leukocyte 12S-lipoxygenase" Arch.Biochem.Biophys.273. 414-422 (1989)
[文献書誌] Maruyama,T: " Immunohistochemical study of arachidonate 12-lipoxygenase in porcine tissues" J.Histochem. Cytochem.37. 1125-1131 (1989)
[文献書誌] Yamamoto,S.: "New Trends Lipid Mediators Res. Leukotrienes and Prostanoids in Health and Disease" Karger, 34-41 (1989)
[文献書誌] Yamamoto,S.: "Advances in Prostaglandin, Thromboxane,and Leukotriene Research" Raven Press, 444-449 (1989)

1989 年度 実績報告書

プロスタグランジン類の酵素兎疫測定法の開発とその自動化

研究代表者

山本 尚三 徳島大学, 医学部, 教授 (50025607)

研究成果

[文献書誌] Sumitani,K.: "Fatty acid cyclooxygenase activity stimulated by transforming growth factor-β in mouse osteoblastic cells(MC3T3-E1)" Arch Biochem Biophys.270. 588-595 (1989)

[文献書誌] Yamamoto,S.: "Mammalian lipoxygenases molecular and catalytic properties" Prostaglandins Leukotrienes and Essential Fatty Acids. 35. 219-229 (1989)

[文献書誌] Ban,M.: "A flavonoid inhibitor of 5-lipoxygenase inhibits leukotriene production following ischemia in gerbil brain" Stoke. 20. 248-252 (1989)

[文献書誌] Riendeau,D.: "Sensitivity of immunoaffinity-purified porcine 5-lipoxygenase to inhibitors and activating lipid peroxides" Biochem. Pharmacol.38. 2313-2321 (1989)

[文献書誌] Brash,A.R.: "Mechanistic studies of the dioxygenase and leukotriene synthase activities of the porcine leukocyte 12S-lipoxygenase" Arch.Biochem.Biophys.273. 414-422 (1989)

[文献書誌] Maruyama,T: " Immunohistochemical study of arachidonate 12-lipoxygenase in porcine tissues" J.Histochem. Cytochem.37. 1125-1131 (1989)

[文献書誌] Yamamoto,S.: "New Trends Lipid Mediators Res. Leukotrienes and Prostanoids in Health and Disease" Karger, 34-41 (1989)

[文献書誌] Yamamoto,S.: "Advances in Prostaglandin, Thromboxane,and Leukotriene Research" Raven Press, 444-449 (1989)

1989 年度実績報告書

山本尚三徳島大学, 医学部, 教授 (50025607)