| 研究概要 |
我々は化学物質の遺伝毒性予知を目的としたDNA損傷解析法の開発を試みた。そのDNA損傷解析法の原理は〔1〕^<32>Pでラベルしたヒトがん原遺伝子(c-Ha-ras)を用いてDNA塩基配列決定法であるMaxam-Gilbert法を応用することと、〔2〕DNA損傷に関与するラジカルの電子スピン共鳴法による測定の二つの組み合わせに基づくものである。これまでの研究により、以下に示すようにAmesテスト陽性の発がん物質はもとより、Amesテスト陰性の発がん物質でも、ある条件下でDNAと反応することが判明した。(1)Amesテスト陽性の発がん物質(ハロゲン化脂肪族炭化水素、ブタジエンジオキド、ジメチル硫酸、β-プロピオラクトン)はDNA損傷をもたらした。
(2)Amesテスト陰性の発がん性重金属であるニトリロ三酢酸鉄(III)キレ-ト、ニッケル(II)、コバルト(II)は生体内でも生成する過酸化水素の存在のもとでOHラジカル、ニッケル-酸素錯体、一重項酸素をそれぞれ生成し、DNA鎖の切断と塩基の損傷をもたらした。
(3)Amesテスト陰性の発がん物質であるベンゼンやオルトフェニルフェノ-ルの場合は、それぞれの代謝物である1,2,4-ベンゼントリオ-ルおよび2,5-ジヒドロキシビフェニルが銅の存在下でDNA損傷をもたらした。それらの活性種はOHラジカルでなく銅-酸素錯体の可能性が考えられた。
(4)プロモ-タ-活性を有する二酸化硫黄でも、金属イオンの存在下で硫酸ラジカルを生成し、DNA損傷をもたらした。このように我々の開発したDNA損傷解析法はDNAと不可逆的に結合する発がん物質の場合のみならず、ラジカル反応によりDNA損傷をもたらす発がん物質やプロモ-タ-でも有効であった。さらに液体クロマトグラフ質量分析計によるDNA反応生成物の解析法を組み合わせ改良する予定である。
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