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2016 年度 実績報告書

高い水素発生活性を実現する[FeFe]型ヒドロゲナーゼの構造デザイン

公募研究

研究領域人工光合成による太陽光エネルギーの物質変換:実用化に向けての異分野融合
研究課題/領域番号 15H00886
研究機関立命館大学

研究代表者

浅井 智広  立命館大学, 生命科学部, 助教 (70706564)

研究期間 (年度) 2015-04-01 – 2017-03-31
キーワードヒドロゲナーゼ / Hクラスター / 嫌気 / 緑色硫黄細菌 / Chlorobaculum tepidum / コドン最適化 / 光合成水素生産 / HydA1
研究実績の概要

緑藻Chlamydomonas reinhardtiiの[FeFe]ヒドロゲナーゼHydA1 は、コンパクトで有りながら非常に高い水素発生活性をもつ酵素として知られているが、活性中心であるHクラスターの形成と保持に厳密に嫌気的な環境を必要とし、生化学的な解析や応用研究が困難である。本研究課題では、酸素分圧1 ppm 以下の嫌気環境でのタンパク質生産を容易に実現できる、絶対嫌気性の光合成細菌Chlorobaculum tepidumの外来遺伝子発現系を利用し、高い水素発生活性を保持したHydA1の大量生産系を確立することを主な目的としていた。
28年度までの研究により、C. tepidumにおいて高レベルのタンパク質発現は遺伝子のN末端領域の塩基配列に強く依存することを明らかにした。29年度はこの研究成果を利用し、Hクラスター形成に必要な成熟化タンパク質であるHydE、HydF、HydGのHydA1との高レベル共発現を試みた。全長にわたるコドン使用頻度の最適化と、N末端に付加するアフィニティータグの塩基配列を検討した結果、Strepタグ付きの遺伝子の導入によってC. tepidum内でHydEFGを高発現できることがわかった。HydA1と共発現させた結果、ほぼ全てのHydA1にHクラスターを保持させることに成功した。
驚くべきことに、HydA1とHydEFGのC. tepidum共発現株は、培養中に光依存的に水素ガスを発生させていることがわかった。HydA1は本来、光合成伝達系で働くフェレドキシンPetFをプロトン還元の電子供与体としているが、その分子認識は厳密ではなく、C. tepidumの細胞内では別の電子供与体が機能している可能性が示唆された。

現在までの達成度 (段落)

28年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

28年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (10件)

すべて 2017 2016

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 オープンアクセス 1件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (8件) (うち国際学会 5件、 招待講演 1件)

  • [雑誌論文] 酸素発生型光合成の成立過程とその実証方法の再考2016

    • 著者名/発表者名
      浅井 智広, 塚谷 祐介
    • 雑誌名

      光合成研究

      巻: 26 ページ: 43-58

    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Orientations of Iron-Sulfur Clusters FA and FB in the Homodimeric Type-I Photosynthetic Reaction Center of Heliobacterium modesticaldum2016

    • 著者名/発表者名
      T. Kondo, M. Matsuoka, C. Azai, S. Itoh, H. Oh-oka
    • 雑誌名

      The Journal of Physical Chemistry B

      巻: 120 ページ: 4204-4212

    • DOI

      10.1021/acs.jpcb.6b01112

    • 査読あり
  • [学会発表] 絶対嫌気性の光合成細菌Chlorobaculum tepidumの異種遺伝子発現系を利用した緑藻[FeFe]型ヒドロゲナーゼの細胞内成熟化2017

    • 著者名/発表者名
      池田 祐輔、武藤 梨沙、波佐間 雄世、大岡 宏造、栗栖 源嗣、寺内 一姫、浅井 智広
    • 学会等名
      第58回 日本植物生理学会年会
    • 発表場所
      鹿児島大学 郡元キャンパス(鹿児島県鹿児島市)
    • 年月日
      2017-03-17
  • [学会発表] N-terminal Nucleotide Sequence Dependency of Anaerobic Protein Overexpression in the Photosynthetic Green Sulfur Bacterium Chlorobaculum tepidum2017

    • 著者名/発表者名
      Y. Ikeda, Y. Hazama, R. Mutoh, A. Norimitsu, H. Oh-oka, G. Kurisu, K. Terauchi, C. Azai
    • 学会等名
      2017 International Conference on Artificial Photosynthesis
    • 発表場所
      Suzaku Campus, Ritsumeikan University, Kyoto, Japan
    • 年月日
      2017-03-03
    • 国際学会
  • [学会発表] 光合成反応中心複合体に潜む構造機能相関の実験的探索2017

    • 著者名/発表者名
      浅井 智広
    • 学会等名
      第9回 BKCバイオインフォマティクス研究会
    • 発表場所
      立命館大学 びわこ・くさつキャンパス(滋賀県草津市)
    • 年月日
      2017-02-01
    • 招待講演
  • [学会発表] Functions of Evolutionally Conserved antenna chlorophylls in type-1 photosynthetic reaction centers2016

    • 著者名/発表者名
      C. Azai
    • 学会等名
      Photosynthetic and Respiratory Complexes: From Structure to Function
    • 発表場所
      The Van der Valk Hotel Verviers, Vervier, Belgium
    • 年月日
      2016-08-14
    • 国際学会
  • [学会発表] Mutagenic analysis of conserved antenna chlorophylls in type-1 photosynthetic reaction centers2016

    • 著者名/発表者名
      C. Azai, T. Kondo, K. Okuda, K. Terauchi, S. Itoh, H. Oh-Oka
    • 学会等名
      The 17th International Congress on Photosynthesis Research
    • 発表場所
      MECC, Maastricht, The Netherlands
    • 年月日
      2016-08-11
    • 国際学会
  • [学会発表] Structural homology around the special pair chlorophylls among type-1 reaction centers2016

    • 著者名/発表者名
      C. Azai
    • 学会等名
      Satellite Meeting on Photosynthesis
    • 発表場所
      Kyoto University Seminar House (Yoshida Campus), Kyoto, Japan
    • 年月日
      2016-07-02
    • 国際学会
  • [学会発表] Influence of codon bias on the anaerobic protein overproduction in the phototrophic green sulfur bacterium Chlorobaculum tepidum2016

    • 著者名/発表者名
      Y. Hazama, A. Norimitsu, C. Azai, K. Terauchi
    • 学会等名
      Satellite Meeting on Photosynthesis
    • 発表場所
      Kyoto University Seminar House (Yoshida Campus), Kyoto, Japan
    • 年月日
      2016-07-01
    • 国際学会
  • [学会発表] 緑色硫黄細菌での異種遺伝子発現におけるコドン使用頻度の影響2016

    • 著者名/発表者名
      波佐間 雄世,則光 明日美,浅井 智広,寺内 一姫
    • 学会等名
      第7回 日本光合成学会年会
    • 発表場所
      東京理科大学 葛飾キャンパス(東京都葛飾区)
    • 年月日
      2016-05-27

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公開日: 2018-01-16  

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