| 研究実績の概要 |
平成30年度は、タンパク質ケミカルラベリングに重要な修飾剤を最適化することで、非特異的な修飾反応を抑え、標的タンパク質を高選択的・高効率で修飾することができるMAUra を新たなラベル化剤として見出した（Chem. Commun. 54, 5871, 2018）。アミノ酸のチロシン誘導体との光反応やCV 測定から、MAUra はチロシン残基との反応効率が、通常ラベル化剤として用いられているtyramide の5 倍向上しており、MAUra から生じる活性種が不安定であるためRu 光触媒から離れた距離に位置するタンパク質への非特異的な反応が抑えられたことが示唆された。そこで、このMAUra を用いて、タンパク質混在系中のリガンド結合力の弱いタンパク質の検出を行なった。年度の途中に、細胞内触媒固定化技術開発に使用していたラベル化剤の合成装置に不測の故障が生じたため、当装置の修理・調整が必要となり、細胞内触媒固定化技術開発の再開までに3ヶ月間を要したが、ラベル化剤の合成は完了した。MAUra をラベル化剤としてRu 光触媒固定化アフィニティービーズ上に修飾させたラクトースに結合した、極めて結合力の弱いレクチン（解離定数Kd = 770 μM）の検出することに成功した。また、申請者が最近見出した、細胞膜透過性とタンパク質ラベル化の触媒能に優れたフラビン系の有機光触媒を活用し、対象のモデルとして低酸素誘導因子HIF-1αを選択し、そのタンパク質のN 末にその機能への影響が少ない低分子構造の捕捉タグを遺伝子工学的に導入することを、検討した。しかし、HaloTagーHIF-1αタンパク質を生細胞内に一過的に発現させることにはまだ成功していない。
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