| 研究実績の概要 |
A1. RFFL fragment 由来 RFFL-ΔF508 NBD1, RFFL-UbcH5c PPI 阻害ペプチドの同定：RFFL ペプチドライブラリーを用いた AlphaLISA により，複数の RFFL- ΔF508 NBD1 PPI 阻害ペプチドを同定した．RFFL-UbcH5c PPI に関しては，精製タンパク質を用いた AlphaLISA は確立できなかったが，NanoBiT法による細胞内相互作用の定量に成功した．
A2. RFFL複合体の大量調製・結晶化：RFFL タンパク質の大量精製を行い，結晶化を行ったが，結晶は得られなかった．
A3. CF-HBE における CFTR 活性評価法の確立：CF治療薬の前臨床試験の最終評価系である ΔF508ホモ変異を持つCF患者気道上皮初代培養細胞（CF-HBE）における ΔF508 CFTR イオンチャネル活性評価法を確立した．分化したCF-HBEに CF治療薬 Orkambi を48時間処理し，ΔF508-CFTR塩素イオンチャネルの機能をUssing chamberを用いた短絡電流測定法で測定した結果，CF治療薬の有効性を評価できた．
B1. 形質膜 CFTR のユビキチンコードの解明：post-Golgi 及び形質膜に存在する ΔF508 CFTR-His-Biotin を BHK 細胞ミクロソーム分画から Ni beads 及び Neutravidin beads を用いたタンデムプルダウンにより変性状態で精製した．精製 CFTRを Ubiquitin-AQUA/PRM法で解析し，ユビキチンコードの絶対定量を行った結果，小胞体とは異なるポリユビキチン化パターンが得られた．
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