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マイナス鎖RNAウイルスが感染細胞で増殖する際、ほとんどすべての増殖過程において、ウイルス粒子や感染細胞にダイナミックな構造変化が生じる。これらの構造変化は、ウイルスが効率よく増殖するために必要なウイルスタンパク質同士の相互作用、あるいはウイルスタンパク質と細胞性因子との相互作用によって引き起こされるため、それらの構造変化を明らかにすることは、ウイルス増殖環を理解する上で欠かせない情報となる。本研究課題では、マイナス鎖RNAウイルスのアセンブリー機構を明らかにするために、マールブルクウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス等の高病原性ウイルスを細胞に感染させ、感染細胞内でダイナミックに変化するウイルス因子および細胞因子の電子顕微鏡解析ならびに3次元立体構造解析を行う。本年度はエボラウイルスのタンパク質発現系を用いて、様々な組み合わせでウイルスタンパク質発現細胞を準備し、サンプルの作製を行った。本実験では、化学固定法におけるアーティファクトを排除するために、急速凍結法および凍結置換法にてサンプルの作製を行った。現在、本サンプルを用いて、主に細胞表面からの出芽のメカニズムに着目し、出芽ウイルス粒子を含む形質膜近辺の立体構造解析を電子線トモグラフィー法により行っている.
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