| 研究概要 |
1)PIP5Kによる根毛形成制御機構の解析
PIP5KとROPの根毛形成における機能的相互作用を検証するために、根毛細胞で発現するPIP5K遺伝子およびROP遺伝子の突然変異体の根毛形態を観察した、,その結果、pip5k4およびrop2変異体においてpip5k3と同様の根毛伸長の抑制が観られた。
また、pip5k3pip5k4およびpip5k3rop2二重変異体においてより顕著な根毛伸長の抑制が観られた。
PIP5K3-mCherryおよびYFP-ROP2の両融合タンパク質をそれぞれPIP5K3遺伝子プロモーターおよびROP2遺伝子プロモーターを用いて発現させ、伸長中の根毛細胞におけるそれらの動態および共局在性の観察を行なった。また、タンパク質間相互作用のin vitro結合実験を進め、ROP2におけるPIP5K3との結合に必要な構造の解析を行なった。
2)PLDζ1の細胞内シグナル伝達および細胞分化制御への関わりの解析
PLDζ1遺伝子機能の解析のために、PLDζ1遺伝子プロモーターにより発現させたPLDζ1-mCherryと各種細胞内局在マーカーとの共局在性を観察した。また、同様の手法によりPLDζ1のシグナル伝達下流で働くと予想されるPDK1との共局在性を観察した。さらに、これまでに作製されたPLDζ1遺伝子発現抑制系においてそれらマーカーの動態を観察することにより、PLDζ1遺伝子機能が根毛形態形成のどのような過程に関与するのかを解析した。これらの結果より、PLDζ1はエンドソームを含む細胞内膜系に局在し、様々な細胞内シグナル伝達に関与することが示唆された。
|
