公募研究
我々は、ウシ体細胞クローン胚においてマウス体細胞クローン胚と同様にXist遺伝子が過剰に発現することを明らかにしており、Xist遺伝子発現動態が哺乳動物に共通した体細胞クローン産子作出のキーファクターである可能性がある。そこでウシ体細胞クローン技術における体細胞核の初期化機構や体細胞クローン胚の異常原因の解明、ウシ体細胞クローン産子作出効率の向上を目的として、RNA干渉法を用いたウシ体細胞クローン胚のXist遺伝子の人為的発現制御技術の確立ならびにXist遺伝子発現抑制がウシ体細胞クローン胚の発生およびエピジェネティクス動態におよぼす影響について解析を進めている。平成23年度は、RNA干渉法を用いてウシ体細胞クローン胚のXist発現を人為的に抑制し、胚盤胞期胚への発生効率を検討した。また、Xist遺伝子を標的としたsiRNAをマイクロインジェクションして得られた胚盤胞期胚をレシピエント雌牛に移植した。その結果、Xist-siRNAをマイクロインジェクションしたウシ体細胞クローン胚の胚盤胞期ではXist発現が有意に減少することが明らかとなった。これらXist発現抑制胚の胚盤胞期への発生率は通常の体細胞クローン胚と比較して有意に高い値を示した。Xist発現抑制胚の産子作出率に関しては、妊娠期間満期に明らかになる予定である。さらに、平成23年度には、ウシ体細胞グローン胚のエピジェネティクス動態とその制御機構を明らかにする目的で、ウシ体細胞クローン胚のヒストン修飾動態とクローン産子作出効率との関連を調べた結果、ウシ体細胞クローン胚においてはヒストンH3およびH4のアセチル化状態は産子作出効率に影響をおよぼさないことを明らかにした。
2: おおむね順調に進展している
本課題の交付申請書に記載した課題(1)および(2)に関して、課題(2)については、ほぼ全ての計画を遂行することができた。課題(1)については、遺伝子発現解析対象となるサンプリングをすでに終えており、今後滞りなく遺伝子発現解析を行う予定である。
今後は、Xist遺伝子発現を人為的に抑制したウシクローン胚の受胎成績および産子作出効率を検討する予定であるが、すでに一部の移植実験を前倒しして進めており、さらに今年度追加の移植実験を行う予定である。課題(1)の遺伝子発現解析結果およびXist-sfRNAクローン胚の遺伝子発現動態を受胎・産子作出効率と合わせてデータの検討を行う。
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Journal of Reproduction and Development
巻: (印刷中)
東北畜産学会報
巻: 60 ページ: 74-79
