公募研究
(1)α-synuclein発現ウイルスベクターの作製発現制御ベクターとして、AAV-floxed/stop-GFPベクターのGFP配列を、wild-typeb human α-synucleinに加えて、A53P変異型α-synucleinの配列に置換したベクターを作製した。(2)α-synuclein誘導性パーキンソン病モデルザルの作出CreリコンビナーゼとGFPを発現する逆行性レンチウイルスベクターをサルの線条体全体に注入し、その数週間後に、wild-type α-synucleinや変異型α-synucleinを発現するAAV-floxed/stop-α-synucleinを黒質に注入したサルを作製した。これらのサルに前もってトレーニングしておいた採餌運動課題を実行させて、運動障害の程度を解析するとともに、チロシン水酸化酵素(TH)およびα-synucleinの免疫染色により黒質ドーパミンニューロンの変性・脱落の程度を解析した。その結果、変異型α-synucleinの方がwild-type α-synucleinよりも効果的に細胞死を誘導できることを確認した。(3)パーキンソン病関連行動課題のトレーニングパーキンソン病に関連する行動課題として、採餌運動課題に加えて到達運動課題、さらに、Wisconsin Card Sorting Test(WCST)やギャンブル課題などの認知課題をサルにトレーニングすることを開始した。
2: おおむね順調に進展している
「α-synuclein発現ウイルスベクターの作製」を終了するとともに、「α-synuclein誘導性パーキンソン病モデルザルの作出」についても、当該ウイルスベクターを用いて、線条体に投射する黒質ドーパミンニューロンを広範囲に変性・脱落させたパーキンソンモデルザルの作出に成功し、変異型α-synucleinの方がwild-type α-synucleinよりも効果的に細胞死を誘導できることを明らかにした。
「α-synuclein誘導性パーキンソン病モデルザルの作出」については、CreリコンビナーゼとGFPを発現する逆行性レンチウイルスベクターをサルの被殻の後方部もしくは前方部(あるいは尾状核)に、A53P変異型α-synucleinを発現するAAV-floxed/stop-α-synucleinベクターを黒質の内側部あるいは外側部に注入することにより、線条体への局在性投射を有する特定の黒質ドーパミンニューロン群を選択的に変性・脱落させたパーキンソンモデルザルを作製する。このようなサルにおいて行動学的および組織学的変化を解析する。行動課題には、採餌運動課題に加えて、現在トレーニングを実施している到達運動課題、Wisconsin Card Sorting Test(WCST)やギャンブル課題などの認知課題を用いる。
すべて 2012 2011
すべて 雑誌論文 (9件) (うち査読あり 9件) 学会発表 (20件)
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