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2012 年度 実績報告書

蛋白質リン酸化修飾イメージングの超高感度化とオミクス技術への展開

公募研究

研究領域翻訳後修飾によるシグナル伝達制御の分子基盤と疾患発症におけるその破綻
研究課題/領域番号 23117522
研究機関広島大学

研究代表者

木下 英司  広島大学, 医歯薬保健学研究院, 准教授 (80304418)

研究期間 (年度) 2011-04-01 – 2013-03-31
キーワードフォスタグ / 翻訳後修飾 / リン酸化 / シグナル伝達 / プロテオーム / キナーゼ / ホスファターゼ / 抗体
研究実績の概要

近年,蛋白質リン酸化反応の検出技術は,癌などの分子標的薬のスクリーニング法として注目を集めている。よって,生体内のごく僅かな蛋白質リン酸化反応を網羅的にプロファイルできる,より特異的で,かつ,超高感度な分析技法の開発が急務である。申請者はリン酸基を特異的に捕捉する亜鉛錯体(フォスタグ)に1分子のビオチンを導入したリン酸基認識素子を既に開発している。本研究では,これを改変させることで,既存の機器や発光試薬を改良することなく検出感度を飛躍的に高めることを目指す。当該年度では,昨年度合成に成功した新規ビオチン結合型誘導体(BTL-111,ビオチンとフォスタグ分子間に12分子のエチレングルコールを導入した誘導体)を使用したリン酸化プロテオミクスのための新しいアプリケーションを開発した。以下に研究の成果を列記する。1)抗体アレイ技術を用いたマルチプレックスなリン酸化蛋白質の検出法,2)BioPlex 技術を用いたマルチプレックスなリン酸化シグナルの同定法。この2つのアプリケーションは抗体とフォスタグを用いた蛋白質リン酸化反応のサンドイッチアッセイ法の1つとして位置づけられる。本手法の大きな利点は,抗リン酸化蛋白質抗体が作製されていないような蛋白質のリン酸化を検出できる,複数の蛋白質リン酸化を一度に検出することができる,フォスタグによる検出は蛋白質分子全体のリン酸化反応を検出できるので,部位特異的な抗リン酸化蛋白質抗体と併用することにより多くの情報を入手することができる,などが挙げられる。今後,本法が次世代のシグナル伝達研究に大きく貢献することを期待する。

現在までの達成度 (段落)

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (17件)

すべて 2013 2012

すべて 雑誌論文 (6件) (うち査読あり 6件) 学会発表 (8件) (うち招待講演 1件) 図書 (3件)

  • [雑誌論文] A Phos-tag-based magnetic-bead method for rapid and selective separation of phosphorylated biomolecules2013

    • 著者名/発表者名
      Tsunehiro, M.
    • 雑誌名

      J. Chromatogr. B

      巻: 925 ページ: 86-94

    • DOI

      10.1016/j.jchromb.2013.02.039.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Sandwich assay for phosphorylation of protein multiplexes by using antibodies and Phos-tag2013

    • 著者名/発表者名
      Kinoshita, E.
    • 雑誌名

      Anal. Biochem.

      巻: in press ページ: in press

    • DOI

      10.1016/j.ab.2013.03.029

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Highly sensitive detection of protein phosphorylation by using improved Phos-tag Biotin2012

    • 著者名/発表者名
      Kinoshita, E.
    • 雑誌名

      Proteomics

      巻: 12 ページ: 932-937

    • DOI

      10.1002/pmic.201100639.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Protein phosphorylation in encystment-induced Colpoda cucullus: localization and identification of phosphoproteins2012

    • 著者名/発表者名
      Sogame, Y.
    • 雑誌名

      FEMS Microbiol. Lett.

      巻: 331 ページ: 128-135

    • DOI

      10.1111/j.1574-6968.2012.02560.x.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] EF-1α and mitochondrial ATP synthase β chain: alteration of their expression in encystment-induced Colpoda cucullus2012

    • 著者名/発表者名
      Sogame, Y.
    • 雑誌名

      J. Eukaryot. Microbiol.

      巻: 59 ページ: 401-406

    • DOI

      10.1111/j.1550-7408.2012.00628.x.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] A laborsaving, timesaving, and more reliable strategy for separation of low-molecular-mass phosphoproteins in Phos-tag affinity electrophoresis2012

    • 著者名/発表者名
      Kinoshita-Kikuta, E.
    • 雑誌名

      International Journal of Chemistry

      巻: 4 ページ: 1-8

    • DOI

      10.5539/ijc.v4n5p1

    • 査読あり
  • [学会発表] Highly sensitive imaging of protein phosphorylation by Phos-tag technology2013

    • 著者名/発表者名
      Kinoshita, E.
    • 学会等名
      1st International Symposium on Protein Modifications in Pathogenic Dysregulation of Signaling
    • 発表場所
      東大医科研講堂,東京
    • 年月日
      2013-02-01
  • [学会発表] Phos-tag 技術が拓くタンパク質リン酸化研究の新たな潮流2012

    • 著者名/発表者名
      木下英司
    • 学会等名
      第85回日本生化学会大会シンポジウム
    • 発表場所
      福岡国際会議場,福岡
    • 年月日
      2012-12-16
  • [学会発表] SuperSep Phos-tag プレキャストゲル:迅速,高効率,かつ,高精度なリン酸化シグナル伝達分子の分離検出法2012

    • 著者名/発表者名
      木下英司
    • 学会等名
      第35回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      マリンメッセ福岡,福岡
    • 年月日
      2012-12-11
  • [学会発表] Phos-tag技術によって新たにできるようになったこと2012

    • 著者名/発表者名
      木下英司
    • 学会等名
      新薬理学セミナー 2012
    • 発表場所
      熊本大学薬学部宮本記念館,熊本市
    • 年月日
      2012-11-24
    • 招待講演
  • [学会発表] Phos-tag SDS-PAGE systems for protein phosphorylation profiling under neutral pH conditions2012

    • 著者名/発表者名
      Kinoshita, E.
    • 学会等名
      HUPO 11th Annual World Congress
    • 発表場所
      Hynes Convention Center, Boston, MI, USA
    • 年月日
      2012-09-09 – 2012-09-13
  • [学会発表] リン酸化タンパク質解析のためのフォスタグテクノロジー2012

    • 著者名/発表者名
      木下英司
    • 学会等名
      第63回日本電気泳動学会総会
    • 発表場所
      沖縄コンベンションセンター,宜野湾
    • 年月日
      2012-08-20
  • [学会発表] 改良型Phos-tag Biotinの開発とリン酸化プロテオミクスへの応用2012

    • 著者名/発表者名
      木下英司
    • 学会等名
      日本プロテオーム学会2012年大会
    • 発表場所
      日本科学未来館,東京
    • 年月日
      2012-07-26
  • [学会発表] Phos-tagアフィニティ電気泳動の開発と改良~リン酸化タンパク質の分析2012

    • 著者名/発表者名
      木下英司
    • 学会等名
      第62回日本電気泳動学会シンポジウム
    • 発表場所
      慶応義塾大学薬学部,東京
    • 年月日
      2012-05-11
  • [図書] Phos-tag affinity electrophoresis for protein kinase profiling.2012

    • 著者名/発表者名
      Kinoshita, E.
    • 総ページ数
      22
    • 出版者
      Springer
  • [図書] 臨床プロテオミクス~バイオマーカー探索から個別化医療へ2012

    • 著者名/発表者名
      木下英司
    • 総ページ数
      5
    • 出版者
      金原出版
  • [図書] DNA Replication and Mutation2012

    • 著者名/発表者名
      Kinoshita, E.
    • 総ページ数
      21
    • 出版者
      Nova Science Publishers

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公開日: 2018-02-02  

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