公募研究
本研究では、摂食調節への関与を裏付ける証拠がありながらも「受容体－内在性リガンド」の組み合わせが未だ解決しないシステムを標的とする。すなわち摂食に関与する①脳に局在するオーファン受容体BRS3の内在性リガンド同定 ②視床下部に局在するオーファンペプチドCARTに対する受容体同定を目指した。①海洋微生物の多様性に着目し、カイメン共在細菌群から抽出したDNAをライブラリー化したメタゲノムライブラリーを探索資源とした。まず、10万クローンの中から、ペプチド新生関連遺伝子を持つ120クローンを選択した。次に、BRS3発現培養細胞に各ライブラリークローン由来物質（熱処理した大腸菌培養上清）を適用し、細胞内シグナル応答の評価を行った。クローンの培養条件（メディウム組成、温度、時間、培養容器等）を様々に検討した結果、3クローンの培養上清がBRS3発現系においてCa2+シグナル陽性反応を示した。そこで次に、疎水性クロマトグラフィーによる分画を行い、精製2段階目においてクローン42由来のあるフラクションのCa2+シグナル動員活性が再現性良く得られることを見出した。②種々の神経系由来細胞株にCARTをアプライし、鍵となる活性型リン酸化酵素を検出することによりスクリーニングを行った。その結果、CART55-102の添加によりERK活性が亢進する海馬由来の神経細胞株を同定した。カイメン共生細菌から分離された有用物質・環状ペプチドは、治療に多大に貢献している製剤も多いが、メタゲノムを用いたGPCRのリガンドスクリーニングはこれまでに報告はない。今後も引き続きCART受容体内在性発現細胞とともに、申請者オリジナルの展開が期待できる。
24年度が最終年度であるため、記入しない。
すべて 2013 2012 その他
すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 2件) 学会発表 (2件) (うち招待講演 2件) 備考 (1件)
General Comp Endocrinology
巻: in press ページ: in press
pii: S0016-6480(13)00094-4. 10.1016/j.ygcen.2013.02.020.
Front. Endocrinology
巻: 3.147 ページ: 1-10
10.3389/fendo.2012.00147.
日本薬理学会編集「実践治療薬」
巻: 1 ページ: 273-280
http://home.hiroshima-u.ac.jp/yumist/index.html
