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2012 年度 実績報告書

抗原トリミングアミノペプチダーゼの作用発現メカニズムと制御

公募研究

研究領域先端技術を駆使したHLA多型・進化・疾病に関する統合的研究
研究課題/領域番号 23133504
研究機関京都大学

研究代表者

服部 明  京都大学, 薬学研究科(研究院), 准教授 (50300893)

研究期間 (年度) 2011-04-01 – 2013-03-31
キーワードアミノペプチダーゼ / 小胞体アミノペプチダーゼ / 抗原ペプチド / 強直性脊椎炎 / 一塩基多型 / HLA
研究実績の概要

強直性脊椎炎(AS)感受性ERAP1依存的なHLA-B27提示リガンドの同定に向けた培養細胞株を作製した。テトラサイクリン誘導体(Dox)により遺伝子発現をコントロールすることが可能な細胞株Tet-off HEK293細胞を用い、まずその内在性ERAP1の発現量をshRNAによって低下させた細胞株HEK293/koERAP1細胞を作製した。次いでHEK293/koERAP1細胞にx6 Hisタグを付加したHLA-B*27:05遺伝子を安定に発現するHEK293/koERAP1+B27細胞を樹立した。最後に別途作成したshRNA耐性となるように同義置換を導入したAS感受性ならびに耐性ERAP1遺伝子をDox感受性プロモーターの下流に挿入したプラスミドをHEK293/koERAP1+B27細胞に導入することで、HEK293/koERAP1+B27+rsiERAP1(WT/K528R/Q730E)細胞株を樹立した。本細胞株を用いて各SNP型ERAP1の発現誘導に伴う細胞表面HLA-B27の変化を解析した結果、いずれの場合も細胞表面HLA-B27発現量が低下していたが、AS耐性型である野生型ERAP1の場合がHLA-B27量の低下が最も大きく、AS感受性であるK528RならびにQ730E ERAP1では小さな変化しか認められなかった。これらの結果から、樹立した細胞株がAS感受性ERAP1依存的なHLA-B27リガンドの同定に適していることならびに各SNP型酵素が作り出すHLA-B27リガンドのレパトアが大きく異なっていることが示唆された。

現在までの達成度 (段落)

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2013 2012

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件) 図書 (1件)

  • [雑誌論文] Exon10 Coding Sequence Is Important for Endoplasmic Reticulum Retentin of Endoplasmic Reticulum Aminopeptidase 12012

    • 著者名/発表者名
      Akira Hattori
    • 雑誌名

      Biol. Pharm. Bull.

      巻: 35 ページ: 601-605

    • DOI

      http://dx.doi.org/10.1248/bpb.35.601

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Laeverin/aminopeptidase Q induces trophoblast invasion during human early placentation2012

    • 著者名/発表者名
      Akihito Horie
    • 雑誌名

      Human Reprod.

      巻: 27 ページ: 1267-1276

    • DOI

      doi:10.1093/humrep/des068

    • 査読あり
  • [図書] Handbook of Proteolytic Enzymes (Aminopeptidase Q/Laeverin)2013

    • 著者名/発表者名
      Akira Hattori
    • 総ページ数
      3
    • 出版者
      Elsevier

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公開日: 2018-02-02  

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