• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 課題ページに戻る

2012 年度 実績報告書

人工膜小胞への再構成とプロテオミクスによる尿酸輸送機能単位の定量的発現機能解析

公募研究

研究領域統合的多階層生体機能学領域の確立とその応用
研究課題/領域番号 23136509
研究機関大阪大学

研究代表者

永森 收志  大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (90467572)

研究期間 (年度) 2011-04-01 – 2013-03-31
キーワードトランスポーター / 機能共役 / 尿酸輸送
研究実績の概要

トランスポーター分子の機能特性に基づき、特定の臓器あるいは特定の膜ドメインでの小分子の細胞膜輸送のモデリングを行う際、複数のトランスポーター間の機能共役が輸送機能を大きく修飾する場合は、培養細胞発現系等で得られた単一分子の機能特性の情報では不十分な場合が想定される。本研究は、その典型的な例として腎近位尿細管の管腔側膜ドメインの尿酸輸送を研究対象とし、再構成人工膜小胞プロテオリポソームとプロテオミクスを用いて、管腔側膜ドメインの尿酸輸送を担う「機能単位」(高効率で機能共役し合うトランスポーター群)の実体を解明し、「機能単位」としての特性を明らかにすることを目指した。
尿酸輸送機能単位の再構成を試みる目的で、構築したバキュロウイルス/昆虫細胞発現系を用いて、URAT1、SMCT2およびPDZK1タンパク質を発現・精製した。これらのトランスポーターを人工膜小胞に再構成することで調製したプロテオリポソームを用いて、それぞれの基質の輸送活性を解析し、また同一のプロテオリポソームに分子複合体として再構成して分子間機能共役を検出することに成功した。また、URAT1およびSMCT2の輸送機能、複合体形成時の輸送機能への影響を詳細に解析した。
さらに、網羅的定量的質量分析法を用いて、野生型マウスから調整した刷子縁膜小胞における腎近位尿細管尿酸輸送関連トランスポーターの発現量を定量解析した。また野生型マウスから調整した刷子縁膜小胞を材料にトランスポーターの免疫沈降を行い、共沈降したタンパク質を質量分析計で解析した結果、新たな結合様式を示唆する結果が得られた。
尿酸トランスポーター関連分子集積の構成分子とその量比の解析、再構成したプロテオリポソームの解析、相互作用様式の解析により、尿酸トランスポーター関連分子集積として形成される尿酸輸送機能単位の機能特性を明らかにした。

現在までの達成度 (段落)

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (11件)

すべて 2013 2012

すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 5件) 学会発表 (6件)

  • [雑誌論文] Biological evaluation of 3-[(18)F]fluoro-α-methyl-D-tyrosine (D-[(18)F]FAMT) as a novel amino acid tracer for positron emission tomography.2013

    • 著者名/発表者名
      Ohshima Y
    • 雑誌名

      Ann Nucl Med.

      巻: [Epub ahead of print] ページ: in press

    • DOI

      10.1007/s12149-013-0687-7

    • 査読あり
  • [雑誌論文] NRFL-1, the C. elegans NHERF orthologue, interacts with amino acid transporter 6 (AAT-6) for age-dependent maintenance of AAT-6 on the membrane.2012

    • 著者名/発表者名
      Hagiwara K
    • 雑誌名

      PLoS One.

      巻: 7 ページ: e43050

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0043050

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Establishment of stable cell lines with high expression of heterodimers of human 4F2hc and human amino acid transporter LAT1 or LAT2 and delineation of their differential interaction with α-alkyl moieties.2012

    • 著者名/発表者名
      Khunweeraphong N
    • 雑誌名

      J Pharmacol Sci.

      巻: 119 ページ: 368-380

    • DOI

      10.1254/jphs.12124FP

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Linkage of N-cadherin to multiple cytoskeletal elements revealed by a proteomic approach in hippocampal neurons.2012

    • 著者名/発表者名
      Tanaka H
    • 雑誌名

      Neurochem Int.

      巻: 61 ページ: 240-250

    • DOI

      10.1016/j.neuint.2012.05.008

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Prognostic significance of L-type amino-acid transporter 1 expression in surgically resected pancreatic cancer.2012

    • 著者名/発表者名
      Kaira K
    • 雑誌名

      Br J Cancer

      巻: 107 ページ: 632-638

    • DOI

      10.1038/bjc.2012.310

    • 査読あり
  • [学会発表] 比較定量オミクスを用いた新規ケトン体トランスポーターの生体における機能の解析.2013

    • 著者名/発表者名
      永森收志
    • 学会等名
      日本農芸化学会2013年度大会
    • 発表場所
      仙台市
    • 年月日
      2013-03-26
  • [学会発表] Cellular responses to LAT1-mediated leucine uptake are revealed by using an LAT1 inhibitor and comprehensive phosphoproteomics.2013

    • 著者名/発表者名
      Shushi Nagamori
    • 学会等名
      第86回日本薬理学会年会
    • 発表場所
      福岡市
    • 年月日
      2013-03-23
  • [学会発表] 質量分析計と再構成プロテオリポソームを用いた新規トランスポーター複合体の解析2012

    • 著者名/発表者名
      永森收志
    • 学会等名
      第85回日本生化学会大会
    • 発表場所
      福岡市
    • 年月日
      2012-12-15
  • [学会発表] Comprehensive variability analysis of nutrients absorption mechanism in small intestine by quantitative proteomics.2012

    • 著者名/発表者名
      Takashi Nishiyama
    • 学会等名
      第19回国際質量分析会議
    • 発表場所
      京都市
    • 年月日
      2012-09-19
  • [学会発表] unctional coupling between a Na+-dependent anion transporter SMCT2 and a urate-anion exchanger URAT1 through a scaffold protein PDZK1.2012

    • 著者名/発表者名
      Shushi Nagamori
    • 学会等名
      Gordon Research Conferences, Membrane Transport Proteins
    • 発表場所
      Les Diablerets, Switzerland
    • 年月日
      2012-07-04 – 2012-07-05
  • [学会発表] 腸上皮トランスポーター発現の網羅的変動解析.2012

    • 著者名/発表者名
      西山俊
    • 学会等名
      第121回日本薬理学会近畿部会
    • 発表場所
      京都市
    • 年月日
      2012-06-29

URL: 

公開日: 2018-02-02  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi