今後の研究の推進方策 |
骨格筋特異的GR遺伝子破壊(GRmKO)マウスの解析を基軸に、以下の相互に連関するプロジェクトを並行して推進する。 1. mTORC1がGR転写カスケードに及ぼす影響の生理的意義の解明―GRmKOマウス骨格筋にKLF15, FoxO1, FoxO3を遺伝子導入し、強制的にGR転写カスケードを駆動する。標的遺伝子の発現、プロテアソーム系活性、オートファジー活性、mTORC1活性、筋線維径、筋量、筋力変化を解析し、これら転写因子の骨格筋代謝調節における役割を明確にする。mTORC1によるGR抑制の生理的意義を明確にするため、mTORC1活性調節下にDEX投与を行い、骨格筋代謝状態を対照マウスと比較・解析する。 2. mTORC1による骨格筋GR機能抑制の分子機構の解明―前年度に同定したGR結合因子、GR翻訳後修飾およびエピゲノム修飾の役割解析を行う。結合因子のノックダウン(siRNA)、GRの責任ドメイン、被修飾アミノ酸残基等への点変異導入、骨格筋で重要な他の核内受容体(MR, AR, TR, PPAR, RXR, ERR等)とGRの機能ドメインを交換したキメラ変異体等を利用して、mTORC1によるGR抑制機構におけるタンパク質-タンパク質(またはRNA, DNA)間相互作用を解明する。 3. 骨格筋GR機能阻害による肝臓、脂肪組織における代謝変化機構の解明―前年度と同様に飼育した各マウスの、肝臓、各脂肪組織におけるmRNA発現の網羅的解析を行い、遺伝子発現変化の責任転写因子、責任エピゲノミック修飾を同定する。さらにP1.にて得られた、骨格筋におけるGR転写カスケード標的遺伝子の機能情報、前年度の解析で得られた代謝パラメーター、血漿成分、病理学的知見等の情報をもとに、骨格筋から他の組織へのシグナル伝達機構を解明する。
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