• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 課題ページに戻る

2013 年度 実績報告書

ノックイン細胞を用いたヒト脂肪細胞分化系の構築

公募研究

研究領域食欲と脂肪蓄積の制御と破綻の分子基盤の解明
研究課題/領域番号 25126711
研究機関京都大学

研究代表者

藤倉 純二  京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (70378743)

研究期間 (年度) 2013-04-01 – 2015-03-31
キーワード脂肪細胞 / iPS細胞
研究実績の概要

脂肪細胞分化に必須の転写因子であるPPARγのBACクローンをライブラリーから入手した。
ゲノムと50 bp以上の相同配列を両端に持つマーカー遺伝子断片を作成しBACへのターゲティング断片を作成した。これをBACを保持する大腸菌内へRed/ET recombinase発現ベクターと共にエレクトロポレーションにより導入し、カナマイシン耐性により選択し、BACターゲティングベクターを作成した。
得られたBACターゲティングベクターをヒトiPS細胞へエレクトロポレーションにより導入しG418による薬剤選択によりBACターゲティングベクターの染色体挿入が生じたクローンを単離した。
ゲノムDNAを採取し、定量的PCRによりゲノムに挿入されたベクターのコピー数を産出し正確にノックインされたiPS細胞クローンを複数樹立した。得られたノックインiPS細胞を通常の胚様体形成法により分化させた。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

PPARγノックインiPS細胞の妥当性確認の為既存の脂肪細胞分化系を用いiPS細胞からの分化実験を行ったところ、マーカーであるPPARγの発現が認められないという治験の発見があった。研究遂行上この現象の本質を見極めることは重要であるため、マーカーの再検討を行う必要が生じた。

今後の研究の推進方策

既報の分化系なども用いて、分化マーカーの発現を蛍光により追跡できることを確認後、分化系の最適化を行っていく予定である。
脂肪細胞分化に必須の転写因子としては他にC/EBPα、C/EBPβ等が、またアディポカインとして比較的特異性の高い発現をする遺伝子には、Leptin、Adiponectin等がある。
これらのゲノム遺伝子領域を有するBACクローンをBACライブラリーから入手し、PPARγ同様にノックイン細胞を樹立し、脂肪細胞分化系譜を顕かにする予定である。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2014

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 オープンアクセス 2件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (1件)

  • [雑誌論文] The G-Protein-Coupled Long-Chain Fatty Acid Receptor GPR40 and Glucose Metabolism.2014

    • 著者名/発表者名
      Tomita T, Hosoda K, Fujikura J, Inagaki N, Nakao K.
    • 雑誌名

      Front Endocrinol (Lausanne).

      巻: 5 ページ: 152

    • DOI

      10.3389/fendo.2014.00152.

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Leptin restores the insulinotropic effect of exenatide in a mouse model of type 2 diabetes with increased adiposity induced by streptozotocin and high-fat diet.2014

    • 著者名/発表者名
      Sakai T, Kusakabe T, Ebihara K, Aotani D, Yamamoto-Kataoka S, Zhao M, Gumbilai VM, Ebihara C, Aizawa-Abe M, Yamamoto Y, Noguchi M, Fujikura J, Hosoda K, Inagaki N, Nakao K.
    • 雑誌名

      Am J Physiol Endocrinol Metab.

      巻: 307 ページ: E712-9

    • DOI

      10.1152/ajpendo.00272.2014.

    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [学会発表] 先天性全身性脂肪萎縮症患者からの疾患特異的iPS細胞樹立と解析2014

    • 著者名/発表者名
      森 栄作, 藤倉 純二, 中尾 一泰, 野口 倫生, 日下部 徹, 海老原 健, 田中 孝之, 浅香 勲, 細田 公則, 稲垣 暢也, 中尾 一和
    • 学会等名
      第57回 日本糖尿病学会 年次学術集会
    • 発表場所
      大阪国際会議場
    • 年月日
      2014-05-24

URL: 

公開日: 2016-06-01  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi