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2015 年度 実績報告書

金ナノロッドを用いた分子モーター構造ダイナミクスの高速1分子計測

公募研究

研究領域理論と実験の協奏による柔らかな分子系の機能の科学
研究課題/領域番号 26104507
研究機関大学共同利用機関法人自然科学研究機構(岡崎共通研究施設)

研究代表者

飯野 亮太  大学共同利用機関法人自然科学研究機構(岡崎共通研究施設), 岡崎統合バイオサイエンスセンター, 教授 (70403003)

研究期間 (年度) 2014-04-01 – 2016-03-31
キーワード1分子計測 / 分子モーター
研究実績の概要

回転分子モーターF1-ATPaseは、固定子の3つの触媒サブユニットβが共同的に順番を守ってATPを加水分解して構造変化することで、回転子サブユニットγを一方向に回転させるトルクを発生する。結晶構造中では3つのβは“open”と“closed”の2つの状態を主にとることが知られている。本年度は、ATP加水分解の遅いβ(E190D)変異体の3つのβの1つに金ナノロッドを結合させ、ATP加水分解が律速となる条件下で構造変化をサブミリ秒で検出することに成功した。Open構造の持続時間の分布は指数関数的減衰でフィットされ、時定数は350 msであった。一方、closed構造の持続時間の分布はピークを持つ山形となり、2つの同一な時定数を持つ逐次反応で良くフィットされ、得られた時定数は321 msとopen構造の時定数とほぼ同程度であった。これらの結果は、ATP加水分解律速条件では3つのβのうち2つは常にclosed構造を取っているという従来のモデルとよく一致する。さらに、openとclosedの中間状態である一過的なhalf-closed構造の検出にも成功した。Half-closed構造はopen-to-closed、closed-to-openの両方の遷移で観察された。それぞれの持続時間の分布は指数関数的減衰でフィットされ時定数として6 ms、21 msが得られた。また、金ナノロッドの角速度と粘性係数から、個々のβが発生するトルクの値を求めることにも成功した。

現在までの達成度 (段落)

27年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

27年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (5件)

すべて 2016 2015 その他

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (3件) (うち国際学会 3件、 招待講演 3件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Direct observation of intermediate states during the stepping motion of kinesin-12016

    • 著者名/発表者名
      Isojima H, Iino R, Niitani Y, Noji H, Tomishige M
    • 雑誌名

      Nat Chem Biol

      巻: 12 ページ: 290-297

    • DOI

      doi:10.1038/nchembio.2028

    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [学会発表] 金ナノプローブでタンパク質分子モーターのダイナミクスを観る2016

    • 著者名/発表者名
      飯野亮太
    • 学会等名
      新学術領域研究「柔らかな分子系」第15回ワークショップ『ダイナミクス観測からタンパク質の「柔らかさ」を観る』
    • 発表場所
      大阪府池田市(不死王閣)
    • 年月日
      2016-03-01 – 2016-03-01
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] Dynamics of linear and rotary molecular motors revealed by gold nanoprobes2015

    • 著者名/発表者名
      Ryota Iino
    • 学会等名
      Pacifichem 2015. Technical Symposia. Physical, Theoretical & Computational: Interplay between Chemistry and Dynamics in Biomolecular Machines
    • 発表場所
      Honolulu, Hawaii (Hawaii Convention Center)
    • 年月日
      2015-12-16 – 2015-12-16
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] High speed single-molecule measurement of conformational dynamics of molecular motors probed by gold nanorod2015

    • 著者名/発表者名
      Ryota Iino
    • 学会等名
      KAKENHI International Symposium on "Studying the Function of Soft Molecular Systems"
    • 発表場所
      お台場、東京(未来館)
    • 年月日
      2015-07-10 – 2015-07-10
    • 国際学会 / 招待講演
  • [備考] 自然科学研究機構 岡崎統合バイオサイエンスセンター 飯野グループホームページ

    • URL

      https://groups.ims.ac.jp/organization/iino_g/index.html

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公開日: 2017-01-06  

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