2014 Fiscal Year Annual Research Report
| Project Area | Coupling of replication, repair and transcription, and their common mechanism of chromatin remodeling |
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| Project/Area Number |
22131007
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
山縣 ゆり子 熊本大学, 大学院生命科学研究部, 教授 (40183678)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森岡 弘志 熊本大学, 大学院生命科学研究部, 教授 (20230097)
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| Project Period (FY) |
2010-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 構造生物学 / クロマチンリモデリング / 蛋白質間相互作用 / 時分割結晶内酵素反応解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、ゲノム修復、複製、転写のカップリングと普遍的なクロマチンリモデリング機構の分野におけるさらに新しい視点で、他に波及効果の大きい点として、１）裸のDNA ではなくクロマチンレベルでのDNA を考慮する構造生物学として、クロマチンリモデリングに関わるタンパク質複合体のX線結晶構造解析、２）ゲノム修復、複製に関わる酵素に関して時間軸も加えた4 次元構造（反応過程の追跡）レベルの機能解明と３）これまでの構造生物学ではほとんど考慮されて来なかった水素原子の位置（超高分解能X 線結晶構造解析と中性子結晶構造解析を合わせた精密構造解析）のレベルでの働く仕組みの解明、以上を目的とする。
本研究では、ATP依存的リモデリング複合体ファミリーの中で安井らが損傷認識とカップルして働くと発見したISWIファミリー複合体のhCHRACを対象に、4元（ACF1ΔC1、SNF2HC-1、CHRAC15/17）複合体、3 元（ACF1ΔC1、CHRAC15/17）複合体、2 元（ACF1ΔC1/SNF2HC-1 並びにCHRAC15/17）複合体とSNF2HC-1 のX線結晶構造解析を目指し、大腸菌もしくは昆虫細胞の系で共発現、単独発現を確立し、高純度精製を行い、結晶化スクリーニングを進めた。いくつかの複合体について微結晶を得た。昨年度X線結晶構造解析したSNF2HC-1の立体構造に基づき、変異型の相互作用実験を行い、それらのデータが昨年提案のhCHRACモデルを満足することを確認した。時分割X 線解析についてはhMTH1の結晶内反応の追跡条件の検討を行い、MutT同様、3個の金属（II）イオンが反応に関わることを明らかにした。ｈMTH1の精密構造解析については、結晶の大型化の成功で、現在中性子データ収集を行っており、水素の同定が可能となるところまで進展した。
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| Research Progress Status |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Presentation] Kinetic Crystallography on MutT and its homolog2014
Author(s)
Teruya Nakamura, Miyuki Inazato, Keisuke Hirata, Kohei Yoshikawa, Mami Chirifu, Shinji Ikemizu, Yuriko Yamagata
Organizer
XXIII Congress of the International Union of Crystallography
Place of Presentation
Convention Centre・Montreal
Year and Date
2014-08-05 – 2014-08-12
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