2002 Fiscal Year Annual Research Report
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00J60902
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
和田 俊一 慶應義塾大学, 理工学研究科, 特別研究員(PD)
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| Keywords | TPU0015A / DLD-1 / リボゾームS6サブユニット / caspase 3 / p27 / ERK / IkB / TPU2013 |
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| Research Abstract |
前年度に引き続き、糸状菌由来テルペノイドTPU0015Aのがん細胞足場非依存的増殖阻害作用機構の解析を行った。TPU0015Aにより処理を行った大腸がん由来DLD-1細胞における各種癌遺伝子およびアポトーシス関連遺伝子の発現量の変化、リン酸化状態の変化をウェスタンブロッティングにより解析した。前年度までに見られたリボゾームS6サブユニットのリン酸化の向上やcaspase 3の活性化に加え、TPU0015A処理細胞において、p27の発現量やERKのリン酸化の上昇およびIkBのリン酸化量の減少が見られた。また、抗リン酸化PKA基質抗体を用いたタンパク質リン酸化の検出パターンにもいくつかの変化が見られた。
こうした解析に並行して、本年度は新たにTPU0015Aの直接的な標的となるタンパク質を同定するための実験を行った。本物質自体は、生産菌からの収量が限られるため、まず大量に化学合成することができ、活性を保持する類縁体を用意することとした。足場存在下の細胞への毒性も高まったものの、TPU2008、TPU2009、TPU2013などにTPU0015Aと類似した活性が見られた。このうちTPU2013を用いて以降の実験を行うこととした。本化合物群の構造中、側鎖部位が最も活性への関与が低いことが予想されたことから、この部位をビオチン化したTPU2013を用意した。DLD-1細胞抽出液中にビオチン化TPU2013を加え、ストレプトアビジン結合セファロースによって沈殿させる方法で、TPU2013結合タンパク質の探索を行ったところ、約45kDaおよび約60kDaのタンパク質の特異的な結合が見られた。
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[Publications] Shun-ichi Wada, Masakazu Niimi, Kyoko Niimi, Ann R.Holmes, Brian C.Monk, Richard D.Cannon, Yoshimasa Uehara: "Candida glabrata ATP-binding cassette transporters Cdr1p and Pdh1p expressed in Saccharomyces cercvisiae strain deficient in membrane transporters show phosphorylation-dependent pumping properties"The Journal of Biological Chemistry. 277. 46809-46821 (2002)
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[Publications] Shun-ichi Wada, Sachi Sri Kantha, Takahiro Yamashita, Shigeki Matsunaga, Nobuhiro Fusetani, Shugo Watabe: "Accumulation of H^+ in vacuoles induced by a marine toxin, theonellamide F, in rat embryonic 3Y1 fibroblasts"Marine Biotechnology. 4. 571-582 (2002)
