1990 Fiscal Year Annual Research Report
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01480090
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| Research Institution | University of Tokyo |
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Principal Investigator |
河本 馨 東京大学, 農学部, 教授 (30011894)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
青木 不学 東京大学, 農学部, 助手 (20175160)
酒井 仙吉 東京大学, 農学部, 助教授 (80114487)
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| Keywords | 乳腺 / 細胞培養 / コラ-ゲンゲル / 乳蛋白質 / カゼイン / 遺伝子 / プロラクチン / レセプタ- |
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| Research Abstract |
多数のホルモンの作用によって多種類の蛋白質を合成する乳腺の遺伝子発現系を解明するためには、無血清細胞培養系を確立するとともに、乳蛋白質およびそれをコ-ドする遺伝子の転写・翻訳のアッセイ系を確立し、乳蛋白質の合成に関与するプロラクチンの情報伝達系を解明することが不可欠である。そのため、本研究を行い、以下の成果を得た。
1.浮遊コラ-ゲンゲル細胞培養法によってマウス乳腺を培養し、培養液中に乳蛋白質を合成・分泌させ、カゼインをウェスタ-ンブロットにより検出した。さらに、マウスのαおよぴβカゼインをそれぞれ認識するモノクロ-ナル抗体を作るハイブリド-マを選択した。この実験系を用いて、乳腺を最終分化させるためのホルモンはインシュリン+グルココルチコイド+プロラクチンであることを確認した。ビタミンDの分化誘導作用を検討したが、ビタミンDはグルココルチコイドにかわることができない。
2.乳蛋白質の遺伝子のうち、βカゼインのcDNAおよびゲノムDNAはすでにクロ-ニングされており、酸性乳清蛋白質のcDNAもクロ-ニングされている。本研究では、αカゼインのcDNAのクロ-ニングを試みており、いくつかのクロ-ンを得ているが、まだ同定を終わっていない。そのほかに、分子量約4万の乳蛋白質をコ-ドするcDNAの断片とそのゲノムのDNAをクロ-ニングしたが、これもまだ同定は終わっていない。
3.兎乳腺のプロラクチンレセプタ-を認識するモノクロ-ナル抗体を作り、これを用いて乳腺のレセプタ-を解析した。乳腺のプロラクチンレセプタ-には分子量8万と4万の2種類が存在する。ペプチドマッピングの結果、分子量4万のレセプタ-は分子量8万のレセプタ-の一部であることが明らかとなった。スプライシングの差異か、蛋白質の修飾によるかはいまだ明らかではない。
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[Publications] Sakai,S.: "Thermodynamic analysis of the interaction of prolactin with its receptor in the rabbit mammaryーgland microsomes" Biochem.J.269. 647-650 (1990)
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[Publications] Sakai,S.: "Prolactin and progesterone receptors in pregnancyーdependent mammary tumors in GR/A mice." Proc.Soc.Exp.Biol.Med.195. 375-378 (1990)
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[Publications] Sakai,S.: "Effects of hormones on dissociation of prolactin from the rabbit mammaryーgland receptor." Biochem.J.(1991)
