1990 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
01540531
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Research Institution | Nagoya University |
Principal Investigator |
武田 穣 名古屋大学, 農学部, 助手 (70155026)
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Keywords | プロプラステド DNA / DNA複製開始点 |
Research Abstract |
タバコ培養細胞BY2の定常期細胞を新鮮培地に移植すると,プロプラスチドDNAはすぐに複製を開始するが,核DNAの複製は少なくとも24時間は始まらない。この状態の細胞を ^3Hーチシジンでパルスラベルすると,プロプラスチドDNAの複製中間体のみがラベルされる。この複製中間体を,BenzoylatedーnaphtoylatedーDEAEセルロ-スカラムを用いて分画した。ラベル時間が60分より短かいと,90%以上のカウントが一本鎖DNAを含む画分に回収される。これは,大部分の分子の複製が複製開始点を含む制限酵素断片中にまだとどまっていることを示唆している。 この複製中間体画分をプロ-ブとして,タバコ葉緑体制限酵素断片に対してハイブリダイゼ-ションを行った。その結果,Inverted Repeat 由来の制限酵素断片に強くハイブリダイズし,複製開始点がInverted Repeat内に存在することが示唆された。更に,新鮮培地中での培養時間を変えることにより,プロプラスチドDNAの複制が両方向に進行することが示された。 より詳細な複製開始点のマッピングを行なうため,複製中間体分子上のDー100pを電子顕微鏡を用いて観察した。Dー100pを有する制限酵素断片の多くは,ハイブリダイゼ-ションで強いシグナルを示した場所,即ち,Inverted Repeat内に由来したものであった。異なった制限酵素を用いた結果から,複製開始点は,Inverted Repeatの末端近く,23SrRNA遺伝子の近傍に存在すると考えられた。又,Inverted Repeat のそれぞれに存在する領域(同一塩基配列を有する)が2つとも,in vivoにおいて複製を開始していることが明らかになった。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] Takeda,Y.,Hirokawa,H,Nagata,T.: "The replication origin of proplastid DNA in tobacco cultured cells" submitted to EMBO Journal.
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[Publications] Nishimura,A.,Akiyama,K.,Kohara,Y.Takeda,Y.,Nishimura,Y.et al.: "Control of cell growth and division (eds.Ishihama,A.& Yoshikawa,H.)" 学会出版センタ-,