2002 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子破壊法を用いた高等真核細胞特有のクロマチン会合機構とその構造変化に基づく細胞機能制御の研究
Project/Area Number |
01F00347
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Research Institution | 宮崎医科大学 |
Principal Investigator |
中山 建男 宮崎医科大学, 医学部, 教授
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
AHYAR Ahmad 宮崎医科大学, 医学部, 外国人特別研究員
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Keywords | クロマチン構造 / クロマチン会合 / クロマチンアセンブリーファクター / ヒストン脱アセチル化酵素 / 蛋白質・蛋白質相互作用 / ロイシンジッパーモチーフ / HIRA |
Research Abstract |
本研究は高等真核細胞におけるクロマチンの会合及び構造変化と細胞機能発現制御との関連性を、クロマチンアセンブリーに関与する因子群の機能に焦点を絞って、明らかにすることを目的とする。まず、CAF-1の3つのサブユニット(p48, p60, p150)やp46,酵母のコリプレッサー(Hir1p, Hir2p)のホモログであるHIRA等の機能解析を行い、それらの欠損DT40変異株を作成する。p46とp48の欠損酵母変異株は致死でないのに、p48欠損DT40株は致死性を示し、高等真核細胞では、クロマチンの会合という最も重要な過程が、酵母とは全く異なる可能性がある。本年度に得られた研究実績は次の通りである。 1、ニワトリの新規HIRAのcDNA, genomic DNAをクローニングした。 2、.HIRAの欠損変異および点変異蛋白質を作成し、GST pulldown assay, Western blot, yeast two-hybrid法などで、HIRAはCAF-lp48, HDAC-1, 2と結合し、CAF-1p60, p46, HDAC-3とは結合しないことを明らかにした。 3、HIRAとCAF-1p48の結合には、それぞれの7つのWD dipeptide motifが必須であることを明らかにした。 4、HIRAとHDAC-2の結合には、HIRAのLXXLL motifとHDAC-2のC-末端領域が必須であることを明らかにした。 5、HIRAに関するneoおよびhisDカセットを含む2つのターゲッティングベクターを順次DT40に導入し、ヘテロ(+/-)及びホモ(-/-)DT40変異株を作成した。 6、HRへのホモ(-/-)DT40変異株の増殖速度に遅延が認められた。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] Takechi, S. et al.: "Cloning and characterization of the chick Out binding factor OBF-1"Biochim. Biophys. Acta. 1577. 466-470 (2002)
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[Publications] Takechi, S. et al.: "Chicken HDAC2 down-regulates IgM light chain gene promoter activity"Biochim. Biophys. Res. Commun.. 299. 263-267 (2002)