2002 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
01F00350
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Research Institution | Kyushu University |
Principal Investigator |
中山 敬一 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
FOTOVATI Abbas 九州大学, 生体防御医学研究所, 外国人特別研究員
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Keywords | Axin / Axam / ノックアウトマウス / SUMO化 |
Research Abstract |
体軸形成等の発生分化や発癌に関与するWntシグナル伝達系において中心的な役割を果たす分子群であるβカテニン、APC、GSK-3βというタンパク質と会合するAxinは、さらにAxam(Axin Associated Molecule)という分子に会合する。そこで我々はこのAxamが発生分化のコントロールや発癌に対してどのような作用を有するかを調べるため、Axamノックアウトマウスを作製し、その表現型を調べることを目的としている。 ノックアウトマウスは、Axamゲノム遺伝子より機能領域を欠失させるターゲティングベクターを構築した。これをES細胞にトランスフェクションしてAxam遺伝子の相同組換え体をPCRにてスクリーニングする方法を確立し、相同組換えはサザンブロッティングで確認した。そのES細胞をマウス胚盤胞にマイクロインジェクションした。この胚を偽妊娠させた仮親の子宮に移植し、キメラマウスを得、さらにキメラマウスとC57B1/6マウス(野生型)を交配し、Axam遺伝子の一つのアリルが変異したマウス(Axamヘテロノックアウトマウス)を作製し、現在ヘテロマウス同士を交配することによってノックアウトマウスの作製を試みている。 また、Axamは、そのC末端側にSUMO化を引き起こす酵素に類似のアミノ酸配列を持つことが明らかになった。そこで、マウスcDNAを哺乳類発現ベクターに組み込み過剰発現によって、SUMO化が促進するかどうか、すでにSUMO化されることが明らかとなっているp53を基質に調べた。また、大腸菌における蛋白産生ベクターにAxamのマウスcDNAを組み込み、大腸菌でAxam蛋白を産生精製することを試みた。この精製蛋白とp53を試験管内で混合することによって、試験管内SUMO化反応の構築を試みた。
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Research Products
(18 results)
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[Publications] Minamishima, Y.A. et al.: "Recovery of liver mass without proliferation of hepatocytes after partial hepatectomy in Skp2-deficient mice"Cancer Res.. 62. 995-999 (2002)
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[Publications] Yoshida, K. et al.: "Involvement of p27^<KIP1> degradation by Skp2 in the regulation of proliferation in response to wounding of corneal epithelium"Invest. Ophthalmal. Vis. Sci.. 43. 364-370 (2002)
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[Publications] Koguchi, K. et al.: "Modulation of astrocyte proliferation by cyclin-dependent kinase inhibitor p27Kip1"Glia. 37. 93-104 (2002)
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[Publications] Ikebe, C. et al.: "Isolation and characterization of a novel F-Box protein Pof10 in fission yeast"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 290. 1399-1407 (2002)
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[Publications] Yamanaka, A. et al.: "Multiple Skp1-related proteins in Caenorhabditis elegans. Diverse patterns of interaction with Cullins and F-box proteins"Curr. Biol.. 12. 267-275 (2002)
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[Publications] Kanematsu, T. et al.: "Role of the PLC-related, catalytically inactive protein p130 in GABA_A receptor function"EMBO J.. 21. 1004-1011 (2002)
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[Publications] Miyamoto A. et al.: "Increased proliferation of B cells and auto-immunity in mice lacking protein kinase Cδ"Nature. 416. 865-869 (2002)
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[Publications] Masuda T. et al.: "Clinical and biological significance of S-phase kinase-associated protein 2 (Skp2) gene expression in gastric carcinoma : modulation of malignant phenotype by Skp2 overexpression, possibly via p27"Cancer Res.. 62. 3819-3825 (2002)
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[Publications] Imai Y.et al.: "CHIP is associated with Parkin, a gene responsible for familial Parkinson's disease, and enhances its ubiquitin ligase activity"Mol. Cell. 10. 55-67 (2002)
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[Publications] Garcia-Fernandez. et al.: "Aplidin induces the mitochondrial apoptotic pathway via oxidative stress-mediated JNK and p38 activation and protein kinase Cδ"Oncogene. 21. 7533-7544 (2002)
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[Publications] Nakamichi I. et al.: "Formation of Mallory body-like Inclusions and cell death induced by derequlated expression of keratin 18"Mol. Biol. Cell. 13. 3411-3451 (2002)
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[Publications] Shimoda K. et al.: "Tyk2 is required for the induction and nuclear translocation of Daxx which regulates IFN-α-induced suppression of B lvmphocyte formation"J. Immunol. I. 169. 4707-4711 (2002)
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[Publications] Seto Y.et al.: "Enhanced Th2 cell-mediated allergic inflammation in Tyk2-deficient mice"J. Immunol. 170. 1077-1083 (2002)
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[Publications] Kaneko C. et al.: "Characterization of the mouse gene for the U-box-type ubiquitin ligase UFD2a"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 300. 297-304 (2002)
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[Publications] Tomari Sl et al.: "Glomerular differentiation in p27 and p57 double-mutant metanephroi"Anat. Embryol.. 206. 31-36 (2002)
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[Publications] Shirane M. et al.: "Inherent calcineurin inhibitor FKBP38 targets Bcl-2 to mitochondria and inhibits apoptosis"Nature Cell Biol.. 5. 28-63 (2002)
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[Publications] Shimoda, K. et al.: "Partial impairment of interleukin-12(IL-12) and Il-18 signaling in Tyk2-deficient mice"Blood. 99. 2094-2099 (2002)
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[Publications] Ishida N. et al.: "Phosphorylation of p27^<Kip1> on serine 10 is required for its binding to CRM1 and nuclear export"J. Biol. Chem.. 277. 14355-14358 (2002)