2002 Fiscal Year Annual Research Report
放射線や活性酸素によるDNA塩基損傷の生成とその修復機構の研究
Project/Area Number |
01J02866
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
宮部 泉 京都大学, 大学院・理学研究科, 特別研究員(PD)
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Keywords | 放射線 / 活性酸素 / 塩基損傷 / 5-フォルミルウラシル / 突然変異 / 修復 / DNAグリコシラーゼ / 組換え |
Research Abstract |
8-オキソグアニン(8-oxoG)は放射線や活性酸素により生じる酸化的塩基損傷の代表的なものであり、複製の際にシトシンと同程度にアデニンとも塩基対を形成できるために強い変異原性を持つ。8-oxoGによって生じる突然変異を回避するための大腸菌における修復システムは主にMutT、MutM、MutYからなり、それらの構造、構能ホモログは多くの生物種において存在することが知られている。大腸菌におけるMutMにあたる、8-oxoGを除去するDNAグリコシラーゼ/APリアーゼ活性をもつ酵素は真核生物でも機能的ホモログが見つかっており、ヒトのhOGG1や出芽酢母のyOGG1などがすでに報告されている。しかし、分裂酵母においてはそれらの構造的又は機能的ホモログはまだ見つかっていない。したがって我々はS. pombeに8-oxoGを除去する活性が存在するかどうかを分裂酵母の抽出液を用いて検討した。APリアーゼ活性を持つDNAグリコシラーゼはシッフ塩基中間体を形成する。このときNaBH_4で還元すると、DNAとグリコシラーゼが共有結合するようになる。酵母抽出液と8-oxoGを含む二本鎖オリゴヌクレオチドを100 mM NaBH_4存在下で反応させた後、SDS-PAGEによってタンパク-DNA複合体を解析するtrapping assayを行った。その結果、抽出液中に8-oxoGを含むオリゴヌクレオチドに対して複合体のバンドが検出された。このことはS. pombeに8-oxoGを認識するDNAグリコシラーゼ/APリアーゼが存在することを示唆している。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] I.Miyabe, Q.-M.Zhang, S.Yonei: "Mutagenic effects of 5-formyluracil on a plasmid vector during replication in Escherichia coli"International Journal of Radiation Biology. 77. 54-58 (2002)
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[Publications] I.Miyabe, Q.-M.Zhang, S.Yonei: "Identification of 5-formyluracil DNA glycosylase activity of human hNTH1 protein"Nucleic Acids Research. 30. 3443-3448 (2002)