2002 Fiscal Year Annual Research Report
血小板活性化因子生合成酵素の単離とcDNAクローニング
Project/Area Number |
01J06307
|
Research Institution | The University of Tokyo |
Principal Investigator |
進藤 英雄 東京大学, 大学院・医学系研究科, 特別研究員(DC1)
|
Keywords | 生化学 / 脂質 / 炎症 |
Research Abstract |
ブタ脾臓からタンパク質化学的手法を用いて血小板活性化因子生合成酵素の単離を試みた。本酵素は膜結合型の酵素であると判明し、界面活性剤BIGCHAPによる可溶化に成功した。続いてカラム精製を試みた結果、酵素を濃縮できるカラムは陰イオン交換カラムであるDEAE Sepharoseのみであった。また、活性は減少するものの吸着するカラムとしてヒドロキシアパタイトカラムがあり、酵素活性を指標にSDS-PAGE上のどのタンパク質が目的の酵素か検索中である。 別のアプローチとしてゲノムデータベースの利用も行った。この酵素はアセチル基を水酸基に転移するo-アセチル転移酵素でるので、既知のo-アセチル転移酵素をクローニング、発現し、本酵素の基質であるlyso-PAFと反応するか検討してみた。既に3種類のo-アセチル転移酵素(alcohol acetyltransferase1,2,Galactoside o-acetyltransferase)で検討し、いずれもlyso-PAFを基質としないことが判明した。現在は基質、機能が不明のo-アセチル転移酵素をクローニングしており酵素活性の測定予定である。 また、本酵素を活性化する分子としてリポポリサッカライド(LPS)がある。マウス腹腔マクロファージをLPSで刺激すると酵素活性が上昇することを確認した。LPSによる酵素活性の調節機構の解明や、酵素精製への利用を検討中である。
|
Research Products
(2 results)
-
[Publications] Stromgaard, K.: "Ginkgolide derivatives for photolabeling studies : preparation and pharmacological evaluation"J. Med. Chem.. 45. 4038-4046 (2002)
-
[Publications] Vogensen, S.B.: "Preparation of 7-substituted ginkgolide derivatives : potent platelet-activating factor (PAF) receptor antagonists"J. Med. Chem.. 46. 601-608 (2003)