2003 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
01J60080
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Research Institution | Sapporo Medical University |
Principal Investigator |
佐藤 勉 札幌医科大学, 医学部, 特別研究員(PD)
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Keywords | アポトーシス / 活性酸素 |
Research Abstract |
Fas刺激がJurkat細胞にアポトーシスを誘導する際,Apaf-1,procaspase-9およびcytochrome cはアポトソーム複合体を形成し,その結果,アポトーシスの実行に必須であるprocaspase-3が活性化される.まず,我々は抗procaspase-9抗体を用いた免疫沈降法により,Fas刺激でアポトソーム形成が誘導されることを確認した.次に,NACやMnSOD遺伝子導入によって活性酸素を消去したところ,アポトソームの形成は著明に抑制された.更に,この結果をゲル濾過法によって確認した.これらの結果から,活性・酸素はアポトソーム複合体形成を促進することによってアポトーシスシグナルに関与すると推測された. 2.上述した仮説をin vitroで証明することを目的に,Apaf-1およびprocaspase-9の発現ベクターを構築した.in vitro translation法によってこれらの蛋白を合成し,ヒト胎盤から精製したcytochrome cとあわせ,in vitroでアポトソームの形成を再現した.上記3種類の蛋白を一括して還元剤で処理したところ,アポトソームの形成は阻害されたが,更に酸化剤で処理すると複合体形成能は回復した.また,3種類の蛋白を別個に還元剤で処理したところ,Apaf-1を処理した場合にだけアポトソームの形成阻害が観察された.これらの結果から,活性酸素によるアポトソーム複合体形成の促進は,Apaf-1が酸化されることによって引き起こされると考えられた.
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Hagiwara S, Sato T, et al.: "Inhibition of type I procollagen production by tRNAVal CTE-HSP47 ribozyme."J Gene Med. 5(9). 784-794 (2003)
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[Publications] Matsunaga T, Sato T, et al.: "Interaction between leukemic-cell VLA-4 and stromal fibronectin is a decisive factor for minimal residual disease of acute myelogenous leukemia."Nat Med. 9(9). 1158-1165 (2003)
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[Publications] Kawano Y, Sato T, et al.: "Ex vivo expansion of human umbilical cord hematopoietic progenitor cells using a coculture system with human telomerase catalytic subunit (hTERT) transfected human stromal cells."Blood. 101(2). 532-540 (2003)
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[Publications] Sasaki H, Sato T, et al.: "Induction of heat shock protein 47 synthesis by TGF-beta and IL-1 beta via enhancement of the heat shock element binding activity of heat shock transcription factor 1."J Immunol. 168(10). 5178-5183 (2002)
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[Publications] Takahashi M, Sato T, et al.: "E1B-55K-deleted adenovirus expressing E1A-13S by AFP-enhancer/promoter is capable of highly specific replication in AFP-producing hepatocellular carcinoma and eradication of established tumor."Mol Ther. 5(5Pt1). 627-634 (2002)