1990 Fiscal Year Annual Research Report
プロスタグランジンおよび脂肪酸ω水酸化活性を持つPー450の構造と生理機能
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02217213
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Research Institution | Osaka City University |
Principal Investigator |
楠瀬 恵美 大阪市立大学, 医学部, 助手 (70089960)
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Keywords | チトクロ-ムPー450 / 脂肪酸ω水酸化酵素 / プロスタグランジンω水酸化酵素 / ロイコトリエンω水酸化酵素 / 腎皮質 / サンクロスポリン / cDNAクロ-ニング / ヒト肝ミクロゾ-ム |
Research Abstract |
1.ウサギ腎皮質の脂肪酸ω水酸化酵素,Pー450_<kd>のcDNAクロ-ニングによってその一次構造を決定した。本Pー450はクロフィブレ-ト等のペルオキシゾ-ム増強剤によって誘導されるが,更に免疫抑制剤のサイクロスポリンによってもPー450_<kd>蛋白ならびにmRNA量が顕著に誘導されることを見いだした。2.ウサギ腎皮質より得た3種の脂肪酸等のω水酸化酵素,Pー450_<kaー1>,Pー450_<kd>の全構造を明らかにした結果,互いに85%以上の高いhomologyを有することが示されたが,Pー450_<kaー1>とPー450_<kd>は異なった基質異性を示す。既ちPー450_<kaー1>は脂肪酸とPGAに,Pー450_<kd>は脂肪酸のみに働く。そこで両者のキメラ体を構築して発現させ,活性を測定して基質特異性を特定する部位を検索したところ,Sphl(143残基)サイトよりN末側に両活性認識部位の局在が示唆された。3.ブタの腎皮質からも4種のPー450を分離精製した。その中の2種は分子量が53,000と52,500で脂肪酸のω水酸化を特異的に触媒し,それらのN末端アミノ酸配列はウサギの腎皮質ω水酸化酵素と68%の相同性を示した。他の2種のPー450はヒトのデブリソキン水酸化酵素と類似のN末端アミノ酸配列を示した。4.ラットの肝ミクロゾ-ムにおけるロイコトリエンB_4(LTB_4)のω水酸化活性はプロスタグランジンA_1(PGA_1)によって競争阻害をうけるのでLTB_4とPGA_1のω水酸化反応は同一のPー450で触媒されることが示唆された。一方,ヒトの肝ミクロゾ-ムによってもラウリン酸,PGA_1及びLTB_4はいずれも活発にω水酸化をうけるが,前二者の反応はウサギ肺のプロスタグランジンω水酸化酵素(Pー450_<Pー2>)の抗体により顕著に阻害されるにも拘らず,LTB_4のω水酸化は殆ど阻害をうけない。そこでヒトの肝にはLTB_4に特異的なω水酸化酵素の存在が示唆された。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Kikuta,Y.,Kusunose,E.,Okumoto,T.,Kubota,I.,& Kusunose,M.: "Purification and characterizption of two forms of cytochrome Pー450 ωーhydroxylsase activities toward prostaglandin A and fatty acids from rabbit liver microsomes" J.Biochem.107. 280-286 (1990)
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[Publications] Yoshimura,R.,Kusunose,E.,Yokotani,N.,Yamamoto,S.,Kubota,I.,& Kusunose,M.: "Purification and characterization of two forms of cytochrome Pー450 ωーrabbit kidney cortex microsomes" J.Biochem.108. 544-548 (1990)
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[Publications] Sumimoto,H.,Kusunose,E.,Gotoh,Y.,Kusunose,M.,& Minakami,S.: "Leukotoriene B_4 ωーhydroxylase in rat liver microsomes:Identification as a cytochrome Pー450 that catalyzes prostaglandin A_1 ωーhydroxylation and participation of cytochrome b_5" J.Biochem.108. 215-221 (1990)
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[Publications] Yokotani,N.,Sogawa,K.,Matsubara,S.,Gotoh,O.,Kusunose,E.,Kusunose,M.,& FujiiーKuriyama,Y.: "cDNA cloning of cytochrome Pー450 related to Pー450pー2 from the cDNA library of human placenta,and its gene structure and exprssion" Eur.J.Biochem.187. 23-29 (1990)
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[Publications] Sumimoto,H.,Kikuta,Y.,Kusunose,E.,Kusunose,M.,& Minakami,S.: "Antibodies raised to rabbit ωーhydroxylases toward prostaglandins and fatty acids crossーreact with leukotriene B_4 ωーhydroxylase in human neutrophils(cytochrome Pー450_<LTB4>)" Biochem.Internatl.20. 381-387 (1990)
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[Publications] Yokotani,N.,Kusunose,E.,Sogawa,K.,Kawashima,H.,Kinosaki,M.,Kusunose,M.,& FujiiーKuriyama,Y.: "cDNA cloning and expression of the mRNA for Pー450kd which shows a fatty acid ωーhydroxylating activity" Eur.J.Biochem.(1991)