遺伝子導入による精子不動化単クロ-ン抗体・Fab分画を大量産生する細胞株の樹立

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02671043
• Research Institution: Hyogo Medical University
• Principal Investigator: 山崎 則行 兵庫医科大学, 医学部, 助手 (50174644)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小森 慎二 兵庫医科大学, 医学部, 助手 (60195865) ; 沢井 英明 兵庫医科大学, 医学部, 助手 (80215904)
• Keywords: 精子不動化抗体 / 免疫グログリン遺伝子 / 発現ベクタ-

Research Abstract

1)精子不動化モノクロ-ナル抗体(SIーMab)をコ-ドするcDNAの単離:精子不動化ヒト型IgGlを産生する形質転換細胞株のひとつEn46よりmRNAを抽出・精製して、それを鋳型にcNDAを生成し、ファ-ジベクタ-λgt11に組み込みcDNAライブラリ-を作成した。ヒトIgのJH及びCλをプロ-ブにしてcDNAライブラリ-をスクリ-ニングし、En46が産生するヒトSIーMAbのH鎖及びL鎖をコ-ドするcDNAを単離した。
2)導入遺伝子の作成:プラスミドベクタ-BCMGNeoに単離したγ1とλの両cDNAを直列に挿入した。Fab fragmentを発現させるための遺伝子は、単離したγ1cDNAのCH1ドメインをコ-ドする領域の直後にsitedirected mutagenesisによりストップコドンを導入した遺伝子断片を作成して、それをλ鎖cDNAと共にBCMGNeoに挿入して作製する予定であり、現在その断片の合成まで行った。
3)形質転換細胞株の作成
作成した導入遺伝子を電気穿孔法を用いてIg非産生性マウスミエロ-マ細胞X63.Ag8に導入し、G418を含む選択培地にて形質転換細胞株を選別している所である。ただ、電気穿孔法による遺伝子導入率がやや当初の予想を下回っており、同時に燐酸カルシウム法とDEAEーDEXTRAN法も試みている。