1991 Fiscal Year Annual Research Report
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02807074
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
小出 典男 岡山大学, 医学部附属病院, 講師 (20142333)
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| Keywords | 年代培養肝細胞 / 三次元培養 / 解毒能 / P450 / 人工肝 |
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| Research Abstract |
1.三次元的肝細胞凝集塊の調製とその形成促進因子
ラット肝細胞を非接着環境において培養することにより三次元的肝細胞凝集塊を調製する方法を開発し,この培養系では培地中のEGFとin sulinに加えて肝細胞に由来する凝集塊形成促進因子が三次元的凝集塊形成を促進することを明らかにした。また非接着環境形成素材として固相化された脂貭/グリユサミノグリカン複合体が利用できる可能性が明らかにされた。
2.三次元的肝細胞凝集塊での解毒能
三次元的肝細胞凝集塊には単層培養肝細胞に比し保存されるミクロゾ-ム蛋白が多いばかりでなく,P450およびP450還元酵素活性とそれらの酵素蛋白の転写レベルが高いことが判明した。しかし,保存される酵素蛋白は生体内レベルの数パ-セントに留まるものであった。保存されるP450ではフェノバルビタ-ル誘導型が最も多いこも判明した。
3.肝細胞凝集塊の解毒機能評価系への利用
三次元的肝細胞凝集塊をアルギン酸Ca++ゲルに包理して,バイオリアクタ-として循環培養系に組み込む技術も開発した。ゲル内に脂質/グリコサシノグリカンを同時包埋することにより細胞活性の安定化が得られることも判明した。この循環培養系ではアルブミン合成分泌の他尿素合成も認められた。投与薬剤の解毒バイオリアクタ-として利用できる可能性が示されていると共に,ハイブリッド型人工肝のプロトタイプとしても利用し得る可能性を有している。
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[Publications] H Takabatake,N Koide,T Tsuji: "Encapsulated multicelllular spheroids of rat hepatocytes produce albumin and urea in a spouted bed circulating culture system." Artificial Organs. (1991)
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[Publications] H Matsushima,N Koide,et al.: "Electron microscopic localization of alkaline phosphatase activity in he patocyte spheroids." J clin.Electron Microscopy.23. 660-661 (1991)
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[Publications] K Sakaguchi,N Koide,et al.: "Promotion of spheroid asembly of adult rat hepatocytes by some factor(s)present in the initial 6h conditioned medium of the primary culture." Pathobiology. 59. 351-356 (1991)
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[Publications] 小出 典男,辻 孝夫: "肝細胞機能と組織構築、一発生・分化から形態形成へ、分子機構と医学への展開" 実験医学、. 19. 178-182 (1991)
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[Publications] 小出 典男,辻 孝夫: "肝細胞スフェロイドの構造と機能" 細胞. 23. 18-23 (1991)
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[Publications] H Hada,N Koide,T Tsuji: "Sequence variations in the envelope protein of the variant virus obtained by the polymerase chain reaction." Acta Med Okayama.45. 347-355 (1991)
