2002 Fiscal Year Annual Research Report
哺乳類の生殖細胞におけるゲノムインプリンティングの再成立の分子機構の解明
Project/Area Number |
02F00191
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Research Institution | Tokyo Institute of Technology |
Principal Investigator |
石野 史敏 東京工業大学, 遺伝子実験施設, 助教授
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
LEE Jiyoung 東京工業大学, 遺伝子実験施設, 外国人特別研究員
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Keywords | ゲノムインプリンティング / 再成立機構 / DNA結合蛋白質 / H19 / Igf2r / 配偶子形成過程 |
Research Abstract |
配偶子形成過程におけるゲノムインプリンティングの再成立制御機構を明らかにするために、卵又は精子の中に存在すると考えられるインプリンティング遺伝子の発現制御に関わる細胞内因子を同定することは重要である。以前の研究で検出された候補因子c10結合蛋白質は、インプリンティング遺伝子の発現制御に必須な領域のH19上流DMR中の1.1kb中のc10配列に結合する卵巣と精巣特異的な蛋白質で、H19近隣に位置するPeg8の繰り返し配列にも結合力を持っている。そこで、今回のc10結合蛋白質精製に差し当たってc10とその結合蛋白質について詳しい解析が必要となり次のような実験を行った。 1.H19の1kb cis acting silencerの5'上流まで解析の範囲を広げて、c10結合蛋白質が結合する配列が存在するのか又はc10結合蛋白質以外にも卵と精巣特異的な蛋白質が結合する配列が存在するのかについてGSA方で検討した。 2.Igf2のDMD配列においてもc10結合蛋白質との関連性と卵または精巣特異的な蛋白質が結合する配列の存在について検討を行った。 その結果、(1)H19 DMRのm1(CTCF binding site)の下流にGSAでc10とcompetitionする配列が存在し、このc10と似た配列を含んだ配列には精巣特異的な蛋白質(複合体)が結合することが確認された。また、m4の下流にもc10と似た配列が存在していることが分かった。(2)Igf2r intron2のimplinting box配列や42bp繰り返し配列やその他の配列を用いたcompetition assayでc10 binding proteinとIgf2rでの相互作用は検出できなかった。しかし、Igf2r DMDの3'terminiに存在するrepeat配列に卵巣特異的な蛋白質が結合することが確認された。これらの結果から、精巣の中でゲノムインプリンティングの再成立が起るpaternal imprinting遺伝子(H19)と卵巣のなかで刷り込みを受けるmaternal imprinting遺伝子(Igf2r)の制御に相互独立的な因子が作用することが考えられる。さらに、この結果は卵と精子で二つの違うゲノムインプリンティングの再成立制御機構が存在することを示唆するので、今後のインプリンティング制御因子の同定に重要な意味を持つと予想される。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Lee J, et al.: "Erasing genomic imprinting memory in mouse clone embryos produced from day 11.5 primordial germ cells"Development. 129. 1807-1817 (2002)
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[Publications] Kohda T, Lee J, et al.: "Epigenetic regulation in mammalian development and dysfunction : the effects of somatic cloning and genomic imprinting"International Congress Series. 1246. 151-159 (2002)
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[Publications] Ogura A, lnoue K, Ogonuki N, LeeJ, et al.: "Phenotypic effects of somatic cell cloning in the mouse"CLONING AND STEM CELLS. 4・4. 397-405 (2002)